科研产出
植物茎尖再生与遗传转化技术研究进展
《江苏农业科学 》 2024 北大核心
摘要：植物茎尖的分裂和分化能力强，是良好的植物再生和遗传转化外植体。建立简单高效的茎尖再生体系和遗传转化体系，在植物基因功能验证、性状改良、新品种培育等方面发挥重要作用，从而促进基因工程发展。本文介绍了茎尖分生组织的形态结构，并简述了影响茎尖干细胞分化的调节因子及其在茎尖中的调控机制，以期加深人们对植物茎尖发育调控的认识，为植物茎尖再生体系和遗传转化体系的建立提供理论基础。在此基础上，本文综述了外植体苗龄、茎尖处理方式、培养基、植物生长调节剂、温度等因素对植物茎尖再生体系的影响，并重点讨论和概述了当前影响植物茎尖遗传转化效率的主要原因，包括预培养、茎尖处理方式、侵染方式、菌液浓度及侵染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度、共培养时间、筛选剂等因素。结果表明，对茎尖外植体进行适当预培养和处理、在侵染过程中辅助AS或超声波、选择合适的侵染菌液浓度和共培养时间有利于提高植物茎尖的遗传转化效率。在此基础上，本文进一步探讨了选择合适的基因转化方法、载体类型和优化载体元件提高遗传转化效率的可行性，发现在转化载体上添加发育调节因子是促进植物再生的一种有效策略，推测该方法在植物茎尖研究中具有应用潜力。此外，本文简述了基因编辑发展现状，总结了目前发育调节因子在基因编辑中的应用，并对目前遗传转化技术优化和应用的研究热点进行了讨论，对未来茎尖遗传转化技术的优化和应用进行了展望。
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裂壳菌L-14原生质体制备与再生体系构建
《西南农业学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：[目的]初步构建裂壳菌L-14原生质体制备和再生体系,为同源菌株原生质体制备研究提供理论依据.[方法]研究细胞壁裂解酶组合、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂种类对原生质体制备产量的影响,以获得最优制备方案,同时筛选适合的原生质体再生培养基.[结果]菌株经YEPG液体培养基培养7 d后,使用0.7 mol/L的NaCl作为渗透压稳定剂配置浓度各为20 mg/mL的崩溃酶+裂解酶复合酶液,在30℃、80 r/min条件下酶解5.5 h后可获得较高的原生质体数量,利用PDS培养基的原生质体再生率可达10.65%,显著高于其它类型培养基.[结论]确定了裂壳菌L-14的高效原生质体制备与再生体系,为该菌株遗传转化体系的建立研究奠定基础.
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中华猕猴桃华优遗传转化系统建立研究
《广东农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了更好的利用遗传转化技术进行猕猴桃品种改良研究,以中华猕猴桃华优组培苗幼嫩叶片为材料,研究了外植体分化不定芽再生途径所需的培养条件及转化效率提高方法。结果表明,在叶片不定芽诱导培养基中加入浓度为0.75~1.0 mg/L的TDZ时,叶片愈伤发生率达85.7%~90.1%,不定芽发生率达41.8%~44.6%;在TDZ 1.0mg/L基础上,补充0.1~0.4 mg/L IAA可使叶片愈伤发生率提高到96.7%~100%,不定芽发生率提高到67.4%~71.9%;在农杆菌侵染液与共培养基中同时加入75~100μmol/L浓度的AS,可使GUS瞬时表达率及卡那抗性芽发生率分别提高至27.9%、14.5%;外植体被农杆菌侵染前,的预培养2~3 d有利于提高GUS表达率与卡那抗性芽发生率。GUS染色与PCR扩增检测结果显示,Shiva A基因已转化至中华猕猴桃华优转基因植株。
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农杆菌介导的葡萄柚转化再生体系建立研究
《南方农业学报 》 2013 CSCD
摘要：【目的】建立邓肯葡萄柚上胚轴遗传转化再生体系,为葡萄柚基因转化研究奠定基础。【方法】以邓肯葡萄柚上胚轴为外植体,研究上胚轴不定芽和生根诱导、遗传转化的影响因子。【结果】在添加TDZ0.50～1.00mg/L的培养基上,上胚轴不定芽诱导率为72.7%～81.6%;无菌枝条的最适生根条件为1/2MT添加ABT6号1.0mg/L,生根率可达81.3%。不同抗菌素中,以替门汀杀菌效果较好,且对外植体出芽无明显抑制作用。转化芽选择初期,5～7d的暗培养有利于卡那霉素抗性芽的诱导发生。PCR检测结果显示,7株抗性植株中有6株呈阳性。【结论】建立了邓肯葡萄柚上胚轴植株再生繁殖体系,为其基因转化奠定了基础。
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葡萄柚不定芽再生体系建立研究
《江西农业学报 》 2013
摘要：为建立葡萄柚上胚轴离体再生体系,且为遗传转化技术在葡萄柚上的应用提供产参考,以葡萄柚种子实生苗上胚轴为材料,研究了不同激素种类与浓度对上胚轴愈伤组织诱导与分化及无菌苗生根的影响。结果表明:在添加KT 1.5～2.0 mg/L的MT培养基上,上胚轴切口愈伤发生率及对应的不定芽发生率均高于对照及其它处理;在KT 2.0 mg/L的基础上,添加浓度为0.2～0.3 mg/L的NAA对愈伤分化无增加作用,但对不定芽分化率有较大的提高作用,不定芽分化率达87.23%;3种激素比较,ABT 1.0 mg/L的生根效果高于其它处理,生根率达81.3%;卡那霉素对上胚轴的选择压力为60mg/L。综上所述,MT基本培养基中添加KT 2 mg/L及NAA 0.2～0.3 mg/L对葡萄柚上胚轴的不定芽发生率有显著的促进作用;ABT是无菌苗生根的较合适激素;卡那霉素对上胚轴的选择压力为60 mg/L。
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