科研产出
十字花科黑腐病菌中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的酶学分析
《基因组学与应用生物学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶是磷酸戊糖途径(HMP)的限速酶,在十字花科黑腐病菌8004的基因组中,有2个基因XC1977和XC4082被注释为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)。前期工作发现XC1977突变后,细胞的胞外多糖产量明显降低,而XC4082突变不影响胞外多糖产量。为明确这两个基因的编码产物在Xcc中的生化功能,本工作表达纯化了这两个蛋白,并对这两个蛋白的特征进行分析,发现这两个蛋白均具有6-葡萄糖脱氢酶的活性,但是它们的最适反应温度、最适反应pH、金属离子和烷化剂的敏感性完全不同。而且,XC1977以NAD~+和NADP~+为电子受体,而XC4082只能以NADP~+为电子受体。在以NAD~+和NADP~+为受体时,XC1977的K_m值分别为0.125 mmol/L和0.927 mmol/L,而XC4082以NADP~+为受体时的K_m值为0.364 mmol/L。这表明Xcc细胞合成胞外多糖时,需要NAD~+参与能量代谢。
关键词： 十字花科黑腐病菌 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 酶活力
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十字花科黑腐病菌中HpaM蛋白的突变分析
《基因组学与应用生物学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：我们的前期工作发现,黄单胞菌中的HpaM是一个位于外膜的Ⅲ型分泌系统的装置蛋白,对其编码基因缺失后,病原菌丧失在寄主上的致病力和在非寄主上引起过敏反应的能力。为了进一步了解该蛋白的功能,本研究将十字花科黑腐病菌中HpaM的功能域分别进行缺失突变,并对一些保守氨基酸位点进行定点突变,发现HpaM的7个功能域分别缺失后,蛋白质的功能均丧失;另外8个位点的氨基酸分别突变后,使蛋白质的功能也丧失。这些结果表明,HpaM的每一个功能域,甚至是一些位点的单个氨基酸均是HpaM发挥正常功能所必需的。
关键词： 十字花科黑腐病菌 HpaM蛋白 功能域 氨基酸定点突变
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十字花科黑腐病菌应急反应相关基因spoT_(Xcc)对T3SS基因调控作用的分析
《植物病理学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：通过反向遗传学方法和半定量RT-PCR方法,研究了十字花科黑腐病菌中被注释的应急反应相关基因spoT_(Xcc)与Ⅲ型分泌系统(T3SS)基因的调控关系。基于自杀质粒pK18mob同源整合方法构建了十字花科黑腐病菌spoT_(Xcc)基因(XC_0956)的非极性整合突变体,检测了突变体的多种表型,发现spoT_(Xcc)突变体延迟了在非寄主植物辣椒ECW-10R上引发的过敏反应(HR)。利用GUS(β-葡糖苷酸酶)活性检测、原位组织染色和半定量RT-PCR的方法,发现T3SS相关基因在spoT_(Xcc)基因的非极性整合突变体中表达量降低,表明十字花科黑腐病菌中被注释的应急反应相关基因spoT_(Xcc)显著正调控T3SS相关基因的表达。
关键词： 十字花科黑腐病菌 spoT_(Xcc)基因 过敏反应(HR) T3SS 调控
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