科研产出
发根农杆菌介导的金花茶毛状根活体遗传转化体系的建立
《基因组学与应用生物学 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：金花茶（Camellia petelotii）是我国特有的植物资源，具有较高的观赏价值和药用价值，建立转基因体系可为开展金花茶特定基因功能鉴定和金花茶性状遗传改良提供基本方法。本研究以金花茶成熟叶片为材料，分别以携带红色荧光蛋白基因DsRed2和发育调节因子GRF5的发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）进行离体转化，利用石蜡切片观察叶柄切口处愈伤组织和毛状根的细胞形态。结果表明，金花茶叶柄切口处在发根农杆菌侵染后22 d时就有愈伤组织出现，72 d时生根率达到10.00%左右，而ddH2O对照处理的金花茶叶柄切口处愈伤组织形成的时间较晚，且无毛状根产生。同时，发根农杆菌K599可将外源基因DsRed2和发育调节因子GRF5转入毛状根基因组中，转基因效率为0.83%～3.33%。石蜡切片显示GRF5转基因金花茶愈伤组织中活性细胞较DsRed2转基因愈伤组织中的多，GRF5转基因毛状根中可观察到从内皮层产生毛状根原基，内皮层及中柱鞘细胞染色程度深，细胞活性强。本研究用携带荧光蛋白和发育调节因子基因的发根农杆菌侵染金花茶离体成熟叶片的叶柄切口，诱导金花茶产生转基因毛状根，初步建立了金花茶转基因毛状根诱导体系，为后续金花茶花色和药用次生代谢物含量等性状的遗传改良提供了新思路。
关键词： 金花茶 发根农杆菌 转基因毛状根 石蜡切片 离体叶片转化
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丛枝菌根真菌与胡萝卜毛状根双重培养体系研究
《热带作物学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：以发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)K599诱导胡萝卜产生毛状根,接种丛枝菌根(AM)真菌摩西斗管囊霉(Funneliformis mosseae)建立双重培养体系,研究不同消毒方法、超声波、低温预处理和培养基p H对摩西斗管囊霉孢子萌发的影响及其与胡萝卜毛状根建立双重培养体系的最佳条件.研究结果表明:消毒方法 3孢子萌发率最高,孢子污染率最低,15 d孢子萌发率达48.88%,而污染率仅为9.98%;超声波处理能降低孢子污染率11.17%~14.53%;低温预处理可有效提高孢子的萌发率,4℃低温处理10 d和15 d效果较好,其萌发率分别为70%和65%;AM真菌孢子在水琼脂培养基萌发最佳p H为6.5,萌发率达到48.50%,p H<5.5或p H>8.0均抑制孢子萌发,p H 5.5和p H 8.0的萌发率分别为15.43%和16.06%.消毒孢子先于水琼脂萌发后,再挑取萌发管多,菌丝较长的孢子并将菌丝生长方向正对毛状根方向进行转接,可以提高双重培养的成功率.MSR培养基为双重培养的最优培养基.胡萝卜毛状根与AM真菌双重培养可为菌根真菌繁殖及相关分子机理研究提供可行有效的途径.
关键词： 胡萝卜毛状根 发根农杆菌 丛枝菌根真菌 摩西斗管囊霉 双重培养
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