瓜实蝇不同发育期及组织实时荧光定量PCR内参基因筛选

陈黔; 杨朗; 王凤英; 黄立飞; 曹雪梅; 张建民; 姜建军; 《南方农业学报 》 2023 北大核心 CSCD

摘要：[目的]筛选出适用于瓜实蝇[Zeugodacus cucurbitae(Coquillett)]抗药性分子机制及生理分子机制研究的内参基因及最优组合数,为瓜实蝇抗药性机理研究打下基础.[方法]以不同发育期的敏感品系和抗阿维菌素品系瓜实蝇及其不同组织样本为试验材料,将8个候选内参基因通过实时荧光定量PCR进行表达,并利用geNorm、Norm-Finder、Bestkeeper和RefFinder软件对内参基因表达稳定性进行综合评估分析,筛选出最稳定表达的内参基因并明确最优组合数.[结果]geNorm分析结果显示,不同发育期处理内参基因表达稳定性排序为:RPS13=RpL32(0.269)>TUBE(0.623)>TBP(0.702)>β-tubulin(1.069)>G6PDH(1.366)>Actin3(1.596)>Actin2(1.923);不同组织处理内参基因表达稳定性排序为:RpL32=RPS13(0.132)>TBP(0.345)>TUBE(0.442)>β-tubulin(0.552)>G6PDH(0.780)>Actin2(1.101)>Actin3(1.417),最适内参基因个数为2.NormFinder分析结果显示,不同发育期处理内参基因表达稳定性排序为:RpL32(0.399)>RPS13(0.446)>TUBE(0.738)>G6PDH(0.912)>TBP(0.924)>β-tubulin(1.086)>Actin3(1.092)>Actin2(1.866);不同组织处理内参基因表达稳定性排序为:RpL32(0.090)>RPS13(0.117)>TBP(0.389)>TUBE(0.445)>β-tubulin(0.705)>G6PDH(0.877)>Actin2(1.009)>Actin3(1.567).BestKeeper分析结果显示,不同发育期处理内参基因表达稳定性排序为:TUBE>TBP>RPS13>RpL32>β-tubulin>G6PDH>Actin3>Actin2;不同组织处理内参基因表达稳定性排序为:β-tubulin>TBP>TUBE>RPS13>RpL32>G6PDH>Actin2>Actin3.RefFinder分析结果显示,不同发育期处理内参基因表达稳定性排序为:RpL32>RPS13>TUBE>TBP>G6PDH>β-tubulin>Actin3>Actin2;不同组织处理内参基因表达稳定性排序为RPS13>RpL32>TBP>β-tubulin>TUBE>G6PDH>Actin2>Actin3.[结论]RPS13和RpL32可组合作为瓜实蝇不同发育期、不同组织及阿维菌素抗性分子机制和生理分子机制研究的内参基因.

关键词： 瓜实蝇 内参基因 组织 发育期 实时荧光定量PCR