科研产出
蓝莓采后病原菌胞外脂肪酶的提取及粗酶性质研究
《中国食品学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：以蓝莓采后主要病原菌灰霉为试验菌株,通过单因素试验对其培养基成分和发酵条件进行优化,并研究其酶学性质.结果表明,采用含橄榄油1%、蛋白胨1%,pH 7.0的PDA培养基,发酵温度25℃,发酵时间96 h时,灰霉菌具有最高的产胞外脂肪酶能力.酶学性质研究表明,该脂肪酶对pH和温度的适应范围较宽,在40℃、p H 9.0的反应条件下,粗酶的脂肪酶活性最高;Na+、Fe3+能促进粗酶的活性,K+、Ca2+、Mg2+、Cu2+则抑制粗酶的活力;该粗酶在一定体积分数的异丙醇、甲醇、丙酮中具有良好耐受性,而在乙酸乙酯和二甲苯中处于激活状态.优化使病菌灰霉菌脂肪酶的产率增加,为后续脂肪酶的分离纯化奠定基础.初步探讨胞外脂肪酶的粗酶性质,为蓝莓采前病害防治及采后品质保护提供科学依据.
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高产光学纯(R,R)-2,3-丁二醇工程菌株构建与发酵优化
《生物技术 》 2018 北大核心
摘要：[目的]构建能够专一性合成光学纯(R,R)-2,3-丁二醇的大肠杆菌工程菌,并进行发酵条件优化。[方法]将来源于多粘芽孢杆菌的(R,R)-2,3-丁二醇脱氢酶基因bdh,来源于阴沟肠杆菌的α-乙酰乳酸合成酶基因bud B和α-乙酰乳酸脱羧酶基因bud A与表达载体p Tr C99A连接,导入大肠杆菌中构建人工合成途径。筛选最适的培养基和发酵条件,提高(R,R)-2,3-丁二醇的产量、产率和得率。[结果]获得高效合成(R,R)-2,3-丁二醇的工程菌株GXASB,筛选到最适碳源及其浓度为120 g/L木薯淀粉,最适pH为6.5,最适接种量为10%,在发酵罐中进行同步糖化法发酵,(R,R)-2,3-丁二醇产量达到105.28 g/L,光学纯为99.1%,得率为0.47 g/g,生产强度为1.95 g/(L·h)。[结论]在大肠杆菌中表达基因簇bud B-bud A-bdh能够专一性合成光学纯(R,R)-2,3-丁二醇,经优化发酵条件后,能够显著提高(R,R)-2,3-丁二醇的合成效率。同时工程菌能够利用非粮原料木薯淀粉高效生产(R,R)-2,3-丁二醇,补料发酵产量达到105.28 g/L,为使用廉价原料工业化生产(R,R)-2,3-丁二醇提供参考。
关键词： (R,R)-2,3-丁二醇 人工合成途径 合成生物学 大肠杆菌基因工程菌 非粮原料 发酵条件优化
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重组枯草芽孢杆菌发酵廉价原料生产普鲁兰酶
《生物技术 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：[目的]构建长野芽孢杆菌普鲁兰酶突变体枯草芽孢杆菌工程菌株,优化发酵条件,筛选廉价的培养基原料生产普鲁兰酶。[方法]利用分子生物学手段,将基因pul324和表达载体p WB980连接,构建表达质粒p WB-pul324并转化Bacillus subtilis WB600;对表达产物进行SDS-PAGE分析和初始酶活的测定。进一步优化发酵条件,对不同碳源和氮源进行发酵培养基的筛选,同时研究不同金属离子的添加和培养基初始p H、接种量对发酵产酶的影响。[结果]获得基因工程菌B.subtilis WB600/p WB-pul324,SDS-PAGE电泳结果显示在89 k Da处有特异性条带,发酵初始酶活为12.34 U/ml;筛选得到玉米淀粉水解液和玉米浆干粉为培养基最适碳源和氮源,其最适浓度分别为50 g/L和30 g/L。Mn~(2+)、Fe~(3+)、Fe~(2+)和Tween-80的添加能提高发酵产酶活力。在最适初始p H 6.5,以最适5%接种量接种于优化后的培养基中,摇瓶发酵80 h普鲁兰酶的酶活达到414.48 U/ml。[结论]实现了普鲁兰酶突变体在枯草芽孢杆菌中的高效表达,筛选获得的培养基主要原料经济低廉,经过发酵条件优化后,重组菌酶活达到414.48 U/ml,是之前研究结果(20.16U/ml)的20倍。
关键词： 普鲁兰酶 长野芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌 玉米淀粉水解液 玉米浆干粉 发酵条件优化
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利用甘蔗糖蜜酒精发酵液生产腐植酸的菌种鉴定及发酵条件研究
《中国生物工程杂志 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：从土壤中筛选出一株适合用甘蔗糖蜜酒精发酵液生产腐植酸的菌株H812。单因素实验和正交实验结果表明,该菌株培养的最适酒精发酵液浓度为16°Bx,最适培养条件为:时间8d、温度34℃、摇床转速200r/min、初始pH7.0、接种量12%和装液量50ml/250ml,其中温度对发酵产品影响显著。在优化的条件下,腐植酸产量为38.12 g/L,较优化前提高了148.34%。对H812菌株进行形态特征分析以及ITS序列分析,推测该菌株为曲霉属真菌。
关键词： H812菌株 甘蔗糖蜜酒精发酵液 腐植酸 菌种鉴定 发酵条件优化
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枯草芽孢杆菌B47菌株高产抗菌物质的培养基及发酵条件优化
《微生物学通报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis B47菌株为番茄内生细菌,也是玉米小斑病拮抗菌,能产生对玉米小斑病菌有强烈抑制作用的抗菌物质。以B47菌株发酵液的无菌滤液对玉米小斑病菌的抗菌活性为检测指标,测定B47菌株产抗菌物质培养所需的最佳碳、氮源和无机盐,并通过正交试验法对该菌株产抗菌物质的培养基配方和摇瓶发酵条件进行优化。研究结果表明,B47菌株产抗菌物质最佳碳、氮源和无机盐分别为蔗糖、酵母浸膏和MgSO4 7H2O,最优培养基是YSB(Yeastextract-sucrose-beef extract)培养基,其配方为:蔗糖2%,酵母浸膏2%,牛肉浸膏1.5%,MgSO4 7H2O0.06%,FeSO4 7H2O 0.000 9%,最优发酵条件组合为:30°C,pH 7.0,170 r/min摇床培养6 d,接种量为1%,装液量为40 mL/200 mL。
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