芒果MiRab11基因及突变体的原核表达分析

罗聪; 董龙; 何新华; 艮文全; 李丽淑; 韦鹏霄; 《热带作物学报 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：为研究芒果MiRab11蛋白的互作及其它生物学功能,本文在MiRab11基因序列基础上,采用重叠PCR定点突变技术,获得了2个结构域突变体Mi-Rab11CA和Mi-Rab11DN,将其构建原核表达载体,并成功转化大肠杆菌BL21。SDS-PAGE结果显示,在28℃条件下,用0.5 mmol/L IPTG诱导4 h,可获得大量可溶性蛋白的表达。将可溶性蛋白经Ni-NTA argrose层析柱纯化并western blot鉴定,该重组蛋白均可与抗His单克隆抗体发生特异性免疫反应。本研究为深入研究芒果pET-Rab11蛋白生理活性、特异性结合位点及功能调控打下良好基础。

关键词： 芒果 MiRab11 突变体蛋白 原核表达 纯化 鉴定