不同提取方法对检测单头白背飞虱携带SRBSDV灵敏度的影响

崔丽贤; 李战彪; 谢慧婷; 秦碧霞; 蔡健和; 《贵州农业科学 》 2019 北大核心

摘要：为找到较好的白背飞虱RNA提取方法用于大规模带毒率检测、SRBSDV的早期监测及科学防控提供参考,采用Trizol试剂盒法、改良Trizol法、改良CTAB-LiCl法、改良异硫氰酸胍法和NaOH粗提法5种方法提取单头白背飞虱的总RNA,进行检测比较其提取速率和稳定性.结果 表明:采用Trizol试剂盒法、改良Trizol法、改良CTAB-LiCl法、改良异硫氰酸胍法和NaOH粗提法5种方法提取单头白背飞虱的总RNA浓度分别为113.08 ng/μL、222.43 ng/μL、57.68 ng/μL、102.16 ng/μL和31.06 ng/μL,改良Trizol法和改良CTAB-LiCl法提取的RNA纯度较高.5种方法提取的RNA均能用于SRBSDV的检测,其中改良Trizol法RT-PCR扩增的灵敏度最高,稀释梯度为10-4,NaOH粗提法灵敏度最差,稀释梯度仅为10-1,其余3种均能达到10-3.改良Trizol法提取的虫体RNA较完整且扩增效果稳定,但试剂价格较昂贵,不适合做大量样品提取;NaOH粗提法的灵敏度虽相对较低,但由于操作简便,经济快速,更适合用于大量样品的检测.

关键词： 白背飞虱 总RNA 南方水稻黑条矮缩病毒 RT-PCR灵敏度