科研产出
赤霉素诱导甘蔗节间伸长的cDNA-AFLP差异显示(英文)
《西北植物学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：以‘新台糖22号’甘蔗为材料,在其伸长初期以200mg/L的赤霉素进行叶面喷施处理,对照喷清水,分别提取对照和处理(0、6、12、24h)的总RNA进行等量混合,获得2种不同处理的样品池,采用cDNA-AFLP技术对赤霉素诱导下甘蔗节间伸长的差异表达进行分析。结果显示:(1)通过169对引物组合的选择性扩增,共得到了约11 000条大小在50～700bp的cDNA片段,获得186条差异条带。(2)经反向Northern杂交,于结果显示阳性的TDFs中选取56个片段进行克隆和序列分析,获得56条大小在80～500bp的差异条带。(3)经BLAST分析,按功能可将获得的56条TDFs分为7类,分别为能量与代谢相关基因、未知功能蛋白、未知基因、植物抗性相关基因、细胞壁生物合成与修饰相关基因、信号传导相关基因和转录因子相关基因。该研究获得了一些与甘蔗节间伸长相关的差异基因片段,为进一步研究甘蔗节间伸长的分子机理奠定了基础。
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乙烯利调控甘蔗基因差异表达研究
《南方农业学报 》 2011 CSCD
摘要：【目的】建立并优化乙烯利调控甘蔗基因差异表达的cDNA-AFLP分析体系和银染体系,利用该技术对乙烯利处理的甘蔗进行基因差异表达研究,探讨乙烯利调控甘蔗生长的分子机理。【方法】以甘蔗品种ROC16为材料,在甘蔗生长40d左右时,叶面喷施200mg/L乙烯利溶液(对照为清水)0、3、6、12、24、48h后,分别取甘蔗叶片提取总RNA,建立cDNA-AFLP分析体系和银染体系;利用193对引物组合对乙烯利处理和对照的甘蔗叶片RNA混合池的样品进行差异表达分析,对部分差异转录片段进行回收、克隆、反向Northern杂交验证、序列分析和功能分析等。【结果】经cDNA-AFLP体系反应扩增,乙烯利处理和对照每个样品的扩增条带数均在35～80之间,处理和对照之间条带多态性明显。在反向Northern杂交验证分析中,24个测试样品中有11个无差异,假阳性率高达46%;在乙烯利作用下,甘蔗的CHI、GST、ARP、LHC、核结合蛋白基因以及一批未知基因差异表达,其中CHI、GST、LHC和核结合蛋白基因是与促进植物的抗病抗逆、提高光合作用等密切相关的因子。【结论】cDNA-AFLP技术是研究乙烯利诱导甘蔗相关基因差异表达和调控的一种较有效方法,具有可行性。乙烯利可能是通过调控甘蔗体内GST、CHI、ARP和LHC等基因的表达,从而表现出促进甘蔗生长、提高光合作用、增强抗病抗逆性等生理效应。
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cDNA-AFLP和cDNA-SRAP技术在植物基因差异表达上的应用及其分析比较
《生物技术通报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：对cDNA-AFLP和cDNA-SRAP技术在植物上的应用研究进行了介绍,指出cDNA-AFLP和cDNA-SRAP技术已逐渐成为基因表达研究的重要工具,是构建转录图谱、定位目标性状位点、研究差异基因表达等研究的主要手段,具有广泛广阔的应用前景。但是cDNA-AFLP和cDNA-SRAP技术均具有一定的缺限,主要表现在获得的差异片段还不够全面丰富。cD-NA-AFLP可以扩增到扩增较多的带,但试验程序比较繁琐、昂贵而且耗时较长、操作较困难;而cDNA-SRAP相对比较简便、便宜而耗时较短,较易操作。因而将cDNA-AFLP与cDNA-SRAP技术结合起来,可望得到更全面丰富的差异片段,从而在植物基因差异表达、新基因发现、抗逆性分子机理研究等方面发挥更大的作用。
关键词： cDNA-AFLP cDNA-SRAP 分子标记 差异表达
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纯雌系苦瓜花经AgNO_3诱雄后的雄蕊发育和基因表达
《细胞生物学杂志 》 2009 CSCD
摘要：为了研究AgNO3诱导下纯雌系苦瓜花蕾发育过程中的差异基因表达,本文运用形态学观察、cDNA-AFLP、RT-PCR和反向Northern杂交等技术在形态学和转录组学水平上对花蕾转雄进行了研究。结果显示:(1)花蕾在AgNO3处理后第6天出现雄蕊,第14天形成两性花,而且两性花中的花粉具有完全生活力,第22天后恢复全雌花;(2)从128对引物组合中筛选出可获得丰富清晰条带的引物组合36对,它们从AgNO3处理的花蕾中分离到11个高度表达的差异片段,经克隆、测序和在线比对,有2个未知基因,9个已知基因,其中1个与植物性别分化有关的CYP450家族基因有高度同源性,命名为McCYP72A1;(3)McCYP72A1在AgNO3处理后2～12h内的花蕾中表达,而且在第8h时表达丰度最高,但在处理的根、茎和叶以及对照的各个器官中不表达。结果表明,AgNO3处理可诱导纯雌系苦瓜花蕾中与雄性分化相关基因表达,进而可能导致处理后14天内雌花发育为两性花。
关键词： 苦瓜 纯雌系 诱雄处理 cDNA-AFLP 差异基因表达
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利用cDNA-AFLP技术分析苦瓜纯雌系统AgNO_3诱导分化完全花的基因差异表达
《江苏农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：以苦瓜纯雌系X-黑-d-d为材料,于三叶一心期用300 mg/L AgNO3诱导其分化完全花,并利用cDNA-AFLP技术研究AgNO3处理后72 h内花蕾基因差异表达情况。结果表明:300 mg/L AgNO3能成功诱导苦瓜纯雌系连续性转化为完全花,平均为11.83朵/株;以128对选择性扩增引物扩增对照和处理后不同时期花蕾的cDNA,其中8对引物可获得较多分布均匀的清晰条带,这些条带大部分是组成型表达,少部分是抑制表达或诱导表达的差异条带。
关键词： 苦瓜 纯雌系 完全花 AgNO3 cDNA-AFLP
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乙烯利调控甘蔗生长前期基因表达初报
《热带亚热带植物学报 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：在甘蔗(Saccharum of ficinarum L.)生长前期分别叶面喷施200mg L-1乙烯利和清水,利用cDNA-AFLP技术分析甘蔗经不同处理后体内基因表达的差异情况,以期通过对差异表达基因进行序列分析和功能分析,探讨乙烯利调控甘蔗生长的分子机理。结果表明:经乙烯利处理后的甘蔗叶片,cDNA-AFLP的扩增产物多态性丰富,基因表达差异显著;部分差异片断序列与抗病、抗逆及促进光合作用等相关基因具有较高的同源性。
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