丙酮丁醇梭菌ldhL基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

杨登峰; 郭媛; 马潘蕾; 韦宇托; 黄日波; 《生物技术通报 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：首次从丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum ATCC824)中克隆得到L-乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,ldhL)基因,并将其连接到pSE380表达载体上,得到重组质粒pSE380ldhL,将重组质粒转化到乳酸脱氢酶和丙酮酸裂解酶缺陷的Escherichia coli FMJl44大肠杆菌中进行表达。SDS-PAGE分析表达产物的分子量约为34kD,摇瓶发酵后用HPLC检测分析L-乳酸产量为2.4g/L,纯度达到99.9%,不需要再进行手性分离,为以后在工业上生物法生产高纯度的L-乳酸打下基础。

关键词： L-乳酸 L-乳酸脱氢酶 克隆 表达

甘蔗乙烯受体基因Sc-ERS的克隆与序列分析

邓智年; 黄诚梅; 潘有强; 吕维莉; 李杨瑞; 《广西农业科学 》 2010

摘要：根据已知乙烯受体基因的序列信息,设计1对简并引物和1对特异引物,对甘蔗叶片基因组DNA进行PCR扩增,获得1个甘蔗乙烯受体基因(Sc-ERS)的片段,其大小为4310 bp,包含1个由5个外显子和4个内含子组成的4219 bp大小的完整编码区。Sc-ERS编码区与玉米乙烯受体ERS1基因(AY359578)、水稻乙烯受体ERS1基因(AY043031)编码区的同源性分别为91.4%、61.6%;推导Sc-ERS编码的蛋白包含636个氨基酸残基,与玉米、水稻乙烯受体基因所编码蛋白的氨基酸同源性分别为94.1%、89.4%。其推导蛋白结构分析结果显示,Sc-ERS编码的蛋白和玉米、水稻ERS1所编码的蛋白相同,在N段保守区含有3个跨膜结构,并由3个跨膜结构、GAF结构、HisKA和HATPase_c组成功能域。核苷酸序列分析和蛋白质结构分析结果表明,Sc-ERS基因属于ERS1基因。

关键词： 甘蔗 乙烯受体基因 克隆 序列分析

诸葛菜OvCYP86MF基因的克隆及其特性分析

周生茂; 曹家树; 《核农学报 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：为进一步阐明细胞色素P450基因CYP86MF在诸葛菜发育中的分子机理,本文根据已知同源基因保守序列设计特异引物,利用RT-PCR和RACE技术从诸葛菜中获得一个细胞色素P450基因(OvCYP86MF)全长cDNA序列,该序列全长为1876bp,含有1605bp的完整开放阅读框,可编码534个氨基酸,分子量和等电点分别为61.4kDa和6.90,具有细胞色素P450蛋白的典型特征,即保守结构域FNAGPRLCIG;原核表达显示该基因的融合蛋白在体外可以诱导表达;DANSTAR和Clustal W软件分析表明该基因的全长cDNA序列及其编码氨基酸序列与十字花科物种拟南芥相似性很高,达到80%以上,亲缘关系最近;与CYP86C亚家族成员在氨基酸水平上的相似性均高于50%,因此推断该基因属于CYP86C这个亚家族。Northern杂交分析表明该基因在花蕾中特异表达。

关键词： 诸葛菜 OvCYP86MF基因 克隆 表达

黄皮LEAFY同源基因的克隆与序列分析

何新华; 李杨瑞; 罗聪; 《林业科学 》 2007 北大核心 CSCD

关键词： 黄皮 LEAFY 克隆

金柑LEAFY同源基因克隆与全序列分析

郭永泽; 张利; 李杨瑞; 《广西农业生物科学 》 2007 CSCD

摘要：通过PCR扩增,从融安金柑基因组DNA中克隆出一条2 361 bp的DNA片段,该DNA克隆含有1个2 081 bp的LEAFY同源基因全长序列(FcLFY)。金柑LEAFY同源基因包含2个内含子和3个外显子,编码398个氨基酸。比对结果表明,金柑LEAFY同源基因与甜橙、枳的LEAFY同源基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性均为98%。该研究为今后从分子水平上研究金柑开花调控机理打下了坚实的基础。

关键词： 金柑 LEAFY 克隆

大肠杆菌海藻糖磷酸合酶基因的克隆

张树珍; 李杨瑞; 《广西农业生物科学 》 2002 CSCD

摘要：根据报道的大肠杆菌 (Escherichia coli)海藻糖 6磷酸合酶基因 (ots A) ,设计引物 ,通过 PCR技术从大肠杆菌 XLI菌株的总 DNA中扩增到一个 1 .4kb的片段。经克隆、测序分析 ,该片段长 1 42 5 bp并含一完整的开放读框 (ORF)。在核苷酸水平上 ,该 ORF与已报道的 ots A基因具有 99.86%的同源性。在氨基酸水平上 ,其推断性的编码产物蛋白与 Ots A具有 1 0 0 %一致性

关键词： 大肠杆菌 海藻糖6磷酸合酶基因 克隆