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木豆随机扩增多态性DNA的反应体系研究

文献类型： 中文期刊

作者： 李杨瑞 1 ;

作者机构： 1.广西农科院广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室

关键词： 木豆;随机扩增多态性DNA;分子标记;反应体系

期刊名称： 安徽农业科学

ISSN： 0517-6611

年卷期： 2008 年 36 卷 20 期

页码： 103-105

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]分析影响木豆RAPD-PCR反应中的主要因素,优化反应条件。[方法]以木豆品种ICPL87091为试材,以木豆基因组DNA为模板,通过对PCR反应体系中各种参数的优化设置,分析比较各种因素对RAPD扩增结果的影响,建立适宜的反应体系。[结果]试验得到了较为理想的适宜木豆的反应体系。优化的木豆RAPD反应条件为:模板DNA浓度30 ng,随机引物1.6μmol/L,dNTPs(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)各0.2 mmol/L,Mg2+浓度2.0 mmol/L,Taq酶1.0 U,反应体积为25μl。循环体系为:先94℃1 min,35℃2 min,72℃2 min,5个循环;然后94℃30 s,37℃1 min,72℃1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min。[结论]利用这一反应体系可有效地进行木豆随机扩增多态性DNA分析,极大地提高了实验结果的可重复性。

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