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甘蔗叶绿体DNA的提取方法及其验证分析

文献类型： 中文期刊

作者： 黄玉新 1 ; 罗霆 2 ; 周珊 2 ; 高轶静 2 ; 段维兴 2 ; 杨翠芳 2 ; 周会 2 ; 张革民 2 ;

作者机构： 1.广西大学农学院

2.广西甘蔗遗传改良重点实验室

关键词： 甘蔗;叶绿体DNA;提取;trnL基因;改良的DNase I差速离心法

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2014 年 45 卷 04 期

页码： 26-30

收录情况： CSCD

摘要： 【目的】探索适于普通实验室条件的甘蔗叶绿体DNA(cpDNA)提取方法,为甘蔗叶绿体分子生物学研究提供参考。【方法】参考水稻、小麦等作物cpDNA的DNase I差速离心处理法,采用改良的DNase I差速离心法提纯甘蔗cpDNA,并对其trnL基因序列进行比对分析,证实所提取cpDNA的可行性。【结果】采用改良的DNase I差速离心处理法提取能得到量多、杂质少的cpDNA,用Eppendorf蛋白核酸测定仪检测,平均每克甘蔗样可提取2.71μg cpDNA,OD260/OD280为1.79~1.90。对提取的cpDNA的trnL基因序列进行比对分析,证实参试的甘蔗栽培种、斑割复合体后代及其回交材料的叶绿体trnL基因与已报道的甘蔗栽培种NCo 310、SP-80-3280和割手密HN0046的trnL基因相似度均在99.0%以上,并在381、386、389、392、393、400、488、490 bp等8个位点上检测出碱基突变、插入和缺失现象。【结论】采用改良的DNase I差速离心处理法提取甘蔗叶绿体DNA具有可行性,提取的甘蔗cpDNA完全可以用于后续的分子水平研究。

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