文献类型： 中文期刊

作者： 马春霞 ¹ ; 彭金霞 ² ; 兰宗宝 ³ ; 谢达祥 ² ; 赵永贞 ² ; 陈晓汉 ² ;

作者机构： 1.广西兽医研究所

2.广西水产科学研究院

3.广西农业科学院农业科技信息研究所

关键词： 凡纳滨对虾;表达载体;白斑综合症病毒(WSSV);启动子;口服疫苗

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2013 年 44 卷 12 期

页码： 2080-2084

收录情况： CSCD

摘要： 【目的】构建一种能在对虾细胞内稳定存在的新型表达载体,为对虾口服疫苗的研制奠定基础。【方法】设计特异性引物,以对虾白斑综合症病毒(WSSV)DNA为模板,PCR扩增早期基因启动子IE1的不同长度片段IE(-94/+52)和IE(-945/+52);利用限制性酶切及连接的方法,以IE(-94/+52)和IE(-945/+52)替换pcDNA3.1-GFP的CMV启动子;然后将构建好的表达载体与阳离子脂质体转染试剂TransLipidTM混合,肌肉注射凡纳滨对虾。【结果】经双酶切鉴定,表达载体pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP、pcDNA3.1-IE(-945/+52)-GFP分别获得6150和146 bp、6150和997 bp的目的条带;注射pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP、pcDNA3.1-IE(-945/+52)-GFP的对虾部分体细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,且注射pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP的绿色荧光强度强于注射pcDNA3.1-IE(-945/+52)-GFP。【结论】构建的两个新型表达载体pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP、pcDNA3.1-IE(-945/+52)-GFP均可用于对虾病毒抗原蛋白基因的表达。