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mCTAB-dLiCl法高效提取花生各组织部位RNA及其验证

文献类型： 中文期刊

作者： 刘俊仙 1 ; 王丛丛 2 ; 贺梁琼 3 ; 韩柱强 3 ; 蒋菁 3 ; 钟瑞春 3 ; 李忠 3 ; 唐秀梅 3 ;

作者机构： 1.广西农业科学院

2.仲恺农业工程学院

3.广西农业科学院经济作物研究所

关键词： 花生;RNA提取;mCTAB-dLiCl法;组织部位

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2013 年 44 卷 11 期

页码： 1781-1784

收录情况： CSCD

摘要： 【目的】探讨花生不同组织部位RNA提取方法,为开展花生分子生物学研究奠定基础。【方法】在CTAB法的基础上,设计一种改良的mCTAB-dLiCl法,其使用高质量体积分数的KAC除去组织中的多糖,使用两次10.0 mol/L的LiCl沉淀RNA,采用琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量,核酸蛋白分析仪测定RNA纯度,并通过逆转录、RT-PCR和cDNA-SCoT验证其质量。【结果】采用mCTAB-dLiCl法的RNA产率为554.80μg/g,RNA的A260/A280比率为1.89,RNA非变性琼脂糖凝胶电泳未出现可见的DNA条带;扩增的28S和18S条带比值为2∶1,且条带清晰无拖尾现象;提取的RNA通过逆转录、RT-PCR扩增和cDNA-SCoT扩增验证,均获得较好的扩增效果,获得的RNA和cDNA质量好。【结论】mCTAB-dLiCl RNA提取方法是一种高效提取花生各组织部位RNA的方法,可在花生分子生物学研究中应用。

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