文献类型： 中文期刊
作者： 黄伟华 1 ; 吴碧球 2 ; 颜梅新 1 ;
作者机构： 1. 广西农业科学院生物技术研究所
2. 广西作物病虫害生物学重点实验室/广西农业科学院植物保护研究所
关键词： 荸荠;秆枯病;农杆菌;遗传转化体系
期刊名称： 西南农业学报
ISSN： 1001-4829
年卷期： 2020 年 008 期
页码： 1696-1702
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： [目的]建立农杆菌介导荸荠秆枯病菌(Cylindrosporium eleocharidis)的遗传转化体系,构建该病菌的突变体库并进行突变体筛选,为荸荠秆枯病病原菌的分子机理研究提供参考依据.[方法]运用农杆菌介导的真菌转化方法,将含有绿色荧光蛋白(GFP)的双元载体pEX4转化至荸荠秆枯病菌野生型菌株Ceh中,利用PCR、Southern blotting杂交和荧光显微镜检测等技术验证转化子.通过单因子变量[共培养基中的乙酰丁香酮(AS)、农杆菌诱导时间、病原菌孢子浓度、IM诱导培养基pH、共培养时间和共培养介质]试验,优化农杆菌遗传转化体系,并建立该病菌突变体库,分析突变体的形态变异和致病性.[结果]获得的最佳遗传转化条件为:共培养基中AS浓度为300μmol/L,农杆菌诱导时间6 h,真菌孢子浓度为10~7个/mL,诱导培养基pH 5.6,共培养时间72 h,共培养介质为硝酸纤维素膜.在该优化条件下,农杆菌遗传转化体系转化效率达600~700个转化子/10~7个孢子.随机挑取转化子进行PCR检测均为阳性,T-DNA单拷贝插入率达77.8%,荧光显微镜均可检测到荧光信号.[结论]成功构建了农杆菌介导的荸荠秆枯病病原菌遗传转化体系和T-DNA插入突变体库,并筛选获得表型和致病性缺陷突变体,可用于指导荸荠秆枯病菌基因功能和病菌与寄主互作研究.
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