文献类型： 中文期刊
作者： 卿冬进 1 ; 卢柏亦 2 ; 彭宇婧 2 ; 戴高兴 2 ; 陈韦韦 2 ; 李经成 2 ; 周维永 2 ; 黄所生 2 ; 潘英华 2 ; 黄娟 2 ; 邓国富 2 ;
作者机构： 1.广西农业科学院水稻研究所/广西水稻遗传育种重点实验室
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关键词： 水稻;褐飞虱;Bph3基因;B8AK41蛋白;外源表达;亚细胞定位
期刊名称： 西南农业学报
ISSN： 1001-4829
年卷期： 2025 年 38 卷 001 期
页码： 107-114
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 【目的】外源表达获得B8AK41蛋白，并检测B8AK41蛋白亚细胞定位，为研究该蛋白在水稻抗褐飞虱上的生物学功能提供基础。【方法】对B8AK41蛋白序列进行跨膜区预测，构建原核表达载体诱导外源蛋白表达，纯化目标蛋白并鉴定蛋白多肽序列；构建双元表达载体并转入水稻原生质体检测蛋白亚细胞定位。【结果】通过对B8AK41蛋白的跨膜结构域分析，发现该蛋白第47～99位氨基酸区域可能存在跨膜结构域，因此选取第100～374位氨基酸进行外源表达蛋白片段。通过SDS-PAGE电泳分析外源表达的B8AK41蛋白，结果显示B8AK41蛋白在28℃IPTG诱导下成功表达，采用亲和层析方法可纯化得到分子量在35～40 kD的His6-B8AK41-His6融合蛋白。通过质谱分析纯化得到的蛋白，其中有3条属于B8AK41蛋白的肽段，证明外源表达纯化的B8AK41蛋白完全正确。采用荧光共聚焦显微镜观察到B8AK41蛋白定位在细胞内质网上。【结论】水稻抗褐飞虱基因Bph3的正调控蛋白B8AK41的非跨膜区能够在大肠杆菌中表达，通过亲和层析方法纯化得到融合蛋白His6-B8AK41-His6,后续可将B8AK41蛋白用于抗体制备。B8AK41蛋白定位在水稻细胞内质网上，为研究蛋白功能提供基础。
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