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富集宏基因组DNA中α淀粉酶全长基因的克隆及重组表达

文献类型： 中文期刊

作者： 曾丽娟 1 ; 廖思明 1 ; 王青艳 1 ; 杜丽琴 1 ; 韦宇拓 1 ; 黄日波 1 ;

作者机构： 1.广西大学生命与科学技术学院广西亚热带牛物资源保护利用重点实验室

关键词： 宏基因组;反向-巢式PCR;侧翼序列;α-淀粉酶

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2010 年 30 卷 03 期

页码： 56-60

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用反向-巢式PCR(IN-PCR)从富集土壤宏基因组DNA中克隆到一种α-淀粉酶基因的全序列,其基因登录号为GU045523,测序分析显示与来自Bacillussp.KR-8104耐酸淀粉酶不完整基因同源性为99%。将获得的α-淀粉酶成熟肽基因与表达载体pSE380连接,导入Escherichia coliJM109中,IPTG诱导表达。粗酶液经Ni-NTA、SephacrylS-200纯化后测定酶学性质:重组酶GXAA的最适作用pH为7.0,最适作用温度为75℃,对可溶性淀粉的Km值为11.6g/L。构建突变子E27G、A450T、E27G-A450T,其酶学性质与原始酶没有显著差别。

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