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Bacillius naganoensis普鲁兰酶基因的分子改造及酶学性质研究

文献类型： 中文期刊

作者： 谢能中 1 ; 曹薇 2 ; 王青艳 3 ; 米慧芝 4 ;

作者机构： 1.广西科学院非粮生物质酶解国家重点实验室国家非粮生物质能源工程技术研究中心广西生物质产业化工程院广西生物炼制重点实验室

2.广西大学

3.广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心

4.广西科学院非粮生物质酶解国家重点实验室国家非粮生物质能源工程技术研究中心广西生物炼制重点实验室

关键词： 普鲁兰酶;长野芽孢杆菌;酶分子改造;酶学性质

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2014 年 02 期

页码： 53-57

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:通过缺失原酶上氨基酸残基,提高普鲁兰酶的酶活,并对其突变体重组酶进行酶学特性研究。方法:以Bacillius naganoensis基因组DNA为模板,PCR扩增大小为2 781 bp的普鲁兰酶编码基因,并通过PCR方法缺失原酶上的前78个氨基酸残基,获得突变体PulA234,将编码基因酶切连接到表达载体pET-22b(+),转化Escherichia coli BL21(DE3)。IPTG诱导表达后对表达产物进行SDS-PAGE和酶学特性研究。结果:突变体发酵液的酶活是原酶的19倍,SDS-PAGE电泳结果显示有明显特异性条带,分子质量约为100 kDa。该突变酶的最适反应温度为60℃,最适pH为4.75,在pH 3.8~6.6范围内活性稳定,Cu2+、Ca2+对酶活有激活作用。结论:经改造的重组酶酶活力有所提高,具有良好的pH和酸稳定性,为普鲁兰酶酶制剂工业化生产及应用奠定基础。

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