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利用正交设计法对叉叶苏铁ISSR-PCR反应体系的优化研究

文献类型： 中文期刊

作者： 黄玉源 1 ; 钟晓青 2 ; 刘广林 3 ; 李正文 4 ; 农保选 3 ;

作者机构： 1.仲恺农业技术学院生命科学学院

2.中山大学生命科学学院

3.广西农业科学院

4.广西大学农学院

关键词： 叉叶苏铁;ISSR-PCR;正交设计;单因子试验

期刊名称： 植物研究

ISSN： 1673-5102

年卷期： 2008 年 28 卷 03 期

页码： 304-309

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 比较CTAB法和SDS法提取叉叶苏铁(Cycas micholitzii)的总DNA,发现CTAB法是提取叉叶苏铁总DNA的较好方法;对叉叶苏铁ISSR-PCR反应体系中的4个主要因素dNTPs,TaqDNA聚合酶,引物及Mg2+进行最优条件筛选;采用单因素法探讨DNA模板量、退火温度和循环次数的最佳反应条件,建立了适合于叉叶苏铁的最佳ISSR-PCR反应体系(20μL体系):1×Buffer,75ng DNA模板,dNTPs 250μmol·L-1,Taq酶1.0U,引物0.2μmol·L-1,Mg2+2.5mmo·lL-1,反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,52℃退火1min,72℃延伸2min,循环40次,72℃延伸10min,4℃保存。本研究结果为苏铁纲植物的分子生物学和分子系统学研究提供理论参考。

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