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一个外切菊粉酶基因的克隆表达及酶学性质

文献类型: 中文期刊

作者: 王成华 1 ; 陆雁 2 ; 王青艳 2 ; 申乃坤 2 ; 黄日波 2 ;

作者机构: 1.广西科学院非粮生物质酶解国家重点实验室国家非粮生物质能源工程技术研究中心

2.广西大学生命科学与技术学院

关键词: 菊粉酶;表达;马克斯克鲁维酵母;毕赤酵母

期刊名称: 生物加工过程

ISSN: 1672-3678

年卷期: 2013 年 11 卷 03 期

页码: 40-45

收录情况: CSCD

摘要: 从马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)DSM 5418中克隆出外切菊粉酶(INU)的成熟肽编码区域,在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中实现了高效分泌表达,体积酶活力达到15.27 U/mL,进一步对重组酶进行了纯化与表征。经过(NH4)2SO4沉淀、透析和分子筛过滤后,得到了纯度大于95%的纯化重组酶,SDS-PAGE分析发现INU的表观相对分子质量为9.0×104,大于理论预测值6.0×104。纯化酶液的表征结果表明,INU的最适温度和最适pH分别为55℃和5.0,在此条件下INU对菊粉的Km值和比酶活分别为1.90 mmol/L和433.86 U/mg,对蔗糖的Km值和比酶活分别为27.81 mmol/L和1 249.49 U/mg,I/S值为0.34;HPLC分析表明,INU酶解菊粉的产物由果糖和葡萄糖组成;金属离子Mn2+、Fe3+、K+和Co2+对酶有促进作用,而Zn2+、Cu2+、Ni2+、SDS和EDTA对酶活力有不同程度的抑制作用。

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