文献类型： 中文期刊

作者： 张莉娟 ¹ ; 吴凤 ¹ ; 黄婵婵 ¹ ; 谢晋 ¹ ; 李今朝 ¹ ; 单彬 ¹ ; 陆覃昱 ¹ ;

作者机构： 1.广西壮族自治区亚热带作物研究所

关键词： 西番莲;TeMV;EAPV;CMV;多重RT-PCR

期刊名称： 农业研究与应用

ISSN： 2095-0764

年卷期： 2024 年 37 卷 0Z1 期

页码： 198-206

摘要： 【目的】西番莲是一种具有很高经济价值的热带和亚热带水果，但无性繁殖方式导致病毒病成为西番莲产业发展的严重威胁。为了更好地监控田间西番莲病毒病的发生，特开展本研究，以期建立针对西番莲夜来香花叶病毒（telosma mosaic virus,TeMV）、东亚西番莲病毒（East Asian passiflora virus,EAPV）和黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus,CMV）的多重RT-PCR检测方法。【方法】根据已在GenBank上登记的3种病毒CP基因的保守序列，分别设计了针对TeMV、EAPV和CMV的3对特异性检测引物，通过试验确定了引物浓度、循环数、退火温度等条件，从而获得优化的多重RT-PCR反应体系，并验证了多重RTPCR的检测灵敏度，然后应用优化体系对广西田间采集的40个西番莲叶片样品进行3种病毒的检测。【结果】通过优化筛选，在20μL的PCR反应体系中实现了西番莲TeMV、EAPV、CMV 3种病毒的多重检测，最优反应条件是引物体积TeMV和EAPV各2μL、CMV3μL，循环数35次，退火温度54.9℃；验证结果表明，检测灵敏度最高可达104拷贝/μL。检测结果表明，3对特异性检测引物的扩增产物大小分别为496 bp、279 bp、157 bp。对西番莲叶片样品病毒进行检测的结果表明，TeMV、EAPV和CMV的检测结果分别是97.5%(39/40),95%(38/40)和2.5%(1/40)，而用单一RT-PCR的检测结果分别是100%(40/40), 95%(38/40)和2.5%(1/40)，多重RT-PCR检测结果和单一RT-PCR检测结果的符合度为99.16%(119/120)。同时，TeMV和EAPV倾向于复合侵染，其复合侵染率高达95%(38/40)。【结论】本研究建立了西番莲病毒多重RT-PCR检测的优化体系，能够同时快速、灵敏和可靠地检测TeMV、EAPV和CMV，为这3种西番莲病毒田间控制、检疫规划和诊断提供了基础。