科研产出
根癌农杆菌介导荸荠秆枯病菌转化体系构建及突变体筛选
《西南农业学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]建立农杆菌介导荸荠秆枯病菌(Cylindrosporium eleocharidis)的遗传转化体系,构建该病菌的突变体库并进行突变体筛选,为荸荠秆枯病病原菌的分子机理研究提供参考依据.[方法]运用农杆菌介导的真菌转化方法,将含有绿色荧光蛋白(GFP)的双元载体pEX4转化至荸荠秆枯病菌野生型菌株Ceh中,利用PCR、Southern blotting杂交和荧光显微镜检测等技术验证转化子.通过单因子变量[共培养基中的乙酰丁香酮(AS)、农杆菌诱导时间、病原菌孢子浓度、IM诱导培养基pH、共培养时间和共培养介质]试验,优化农杆菌遗传转化体系,并建立该病菌突变体库,分析突变体的形态变异和致病性.[结果]获得的最佳遗传转化条件为:共培养基中AS浓度为300μmol/L,农杆菌诱导时间6 h,真菌孢子浓度为10~7个/mL,诱导培养基pH 5.6,共培养时间72 h,共培养介质为硝酸纤维素膜.在该优化条件下,农杆菌遗传转化体系转化效率达600~700个转化子/10~7个孢子.随机挑取转化子进行PCR检测均为阳性,T-DNA单拷贝插入率达77.8%,荧光显微镜均可检测到荧光信号.[结论]成功构建了农杆菌介导的荸荠秆枯病病原菌遗传转化体系和T-DNA插入突变体库,并筛选获得表型和致病性缺陷突变体,可用于指导荸荠秆枯病菌基因功能和病菌与寄主互作研究.
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农杆菌介导甘蔗愈伤组织遗传转化体系的优化
《中国生物工程杂志 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：以甘蔗胚性愈伤组织为材料,对愈伤组织增殖、分化、幼苗生根的最适抗生素(Km)浓度进行筛选,并对影响农杆菌介导的甘蔗遗传转化因素:预培养时间、侵染时间和共培养时间等进行了研究。最后确立了甘蔗愈伤组织增殖、分化及幼苗生根三个阶段的最适抗生素(Km)浓度分别为300 mg/L,40 mg/L,20 mg/L。确定了农杆菌浸染的预培养时间、侵染时间和共培养时间分别为4d,30min,4d。PCR检测表明,61.6%的抗性植株可扩增出预期的片段,表明外源基因已经整合到甘蔗基因组中。为进一步的甘蔗基因功能验证及转基因研究提供良好的技术支撑。
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小白菜高效子叶离体植株再生体系的建立
《广西农业科学 》 2006
摘要：以丰顺小白菜带柄子叶为外植体,研究了苗龄、不同激素配比、A gNO3浓度和抗生素、共培养时间对不定芽再生的影响。结果显示,子叶不定芽再生的最佳苗龄为5~9d;经过2d的预培养,在M S+1.0m g/L TDZ+0.1m g/L NAA+7.5m g/L A gNO3+0.5m g/L ABA培养基中,带柄子叶不定芽再生率最高,为82.53%;在含有2.0m g/LIBA的1/2M S0培养基中诱导生根,不定根形成率为100%。抗生素敏感性试验表明,可选择浓度为20m g/L Hyg(潮霉素)作为最适合选择压,抑制农杆菌生长的抗生素选用500m g/L Cb(羧卞青霉素)。不同浓度农杆菌菌液对子叶再生不定芽的影响不大,但共培养时间的长短却明显地影响不定芽的分化。
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农杆菌介导的抗菌肽基因转入枳壳影响因素研究
《西南农业学报 》 2006 CSCD
摘要：以枳壳上胚轴为对象,进行了农杆菌介导的抗菌肽shivaA基因转化影响因素研究。研究结果表明:枳壳卡那霉素选择浓度为60μg/mL;抑菌抗菌素选用头孢噻肟钠较为合适。农杆菌再悬浮液与共培养基中100μMAs的加入可提高转化频率;延迟选择不利于转化率的提高。所得抗性植株经PCR、Southern检测,证实目的基因已整合到植物基因组中。
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农杆菌介导的抗菌肽A基因转入沙田柚影响因素研究
《广西植物 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：以沙田柚上胚轴为对象,进行了农杆菌介导的抗菌肽shivaA基因转入沙田柚影响因素研究。研究结果表明转化中抑菌抗菌素以羧苄青霉素为首选,最佳转化条件为菌液稀释至OD6000.5,浸泡时间10min,共培养3d,卡那霉素起始选择浓度50μg/mL。农杆菌再悬浮液与共培养基中加入150μmol/L阿魏酸可提高转化频率。PCR与Southern杂交证明,外源基因已转入沙田柚基因组中。
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农杆菌介导的枳壳转基因条件优化途径建立研究
《广西农学报 》 2005
摘要：本文以枳壳上胚轴为对象,进行了农杆菌介导的抗菌肽shivaA基因转化影响因素研究,得到了转基因植株。研究结果表明:枳壳上胚轴的卡那霉素选择浓度为60μg/ml;采用头孢噻肟钠为农杆菌抑制剂较好。共培养基3天,共培养基中补充As100μM、0.5%脯氨酸对转化率的促进作用最大;延迟选择不利于转化率的提高。
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农杆菌介导的沙田柚基因转化系统建立研究
《广西农学报 》 2004
摘要：本文以沙田柚上胚轴为对象 ,进行了农杆菌介导的基因转化系统建立影响因素研究。研究结果表明 :沙田柚上胚轴卡那霉素选择浓度为 70mg几 :上胚轴与农杆菌的共培养基中加入 1 50uM的As可提高上胚轴Gus瞬时表达阳性率 ;实生苗苗龄以 2 0— 2 5天为宜 ;上胚轴最适预培养时间为 3天 ,卡那霉素起始选择浓度降为 50mg几有利于转化率的提高
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T-DNA转移研究进展
《生命科学研究 》 2001 CSCD
摘要：植物遗传转化技术近年在农作物性状改良、植物生物反应器利用以及基因功能鉴定等方面得到了广泛的应用 .T -DNA转移是植物细胞农杆菌介导遗传转化整合和表达外源基因的基础 .农杆菌Ti质粒vir基因编码蛋白、农杆菌一些染色体基因编码蛋白及植物细胞一些基因编码蛋白或因子均参与T DNA转移 .转移过程包括农杆菌对植物细胞的识别、附着 ,细菌对植物信号物质的感受 ,细菌vir基因的诱导表达 ,T复合体的形成 ,跨膜运输 ,进核运输和整合等一序列过程 .植物细胞因子与农杆菌T DNA转移相关蛋白的相互作用最近被认为在T DNA转移过程中起重要作用
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