科研产出
农杆菌介导冷调节基因(Cbcor15a)遗传转化甘蔗体系的建立
《南方农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】利用农杆菌介导法,将外源冷调节基因Cbcor15a导入甘蔗愈伤组织,建立快速、高效的甘蔗遗传转化体系,为培育具抗寒性甘蔗品种奠定基础。【方法】以新台糖22号(ROC22)为材料,通过对愈伤组织诱导、分化、生根等培养基进行优化,筛选出外源基因转化甘蔗的适合激素种类与用量、PPT用量、抗生素种类与用量;利用甘蔗转基因二元植物表达载体pCambia1300-Cbcor15a-bar,通过农杆菌介导法将目的基因Cbcor15a导入甘蔗愈伤组织。【结果】当农杆菌菌液OD600为0.4、侵染20 min时有利于愈伤组织分化;甘蔗愈伤组织诱导和分化培养阶段的最佳PPT为0.50mg/L。侵染后在共培养中添加500.00 mg/L抗生素Cef能有效抑制农杆菌,添加300.00 mg/L抗生素Cef能促进愈伤组织分化成苗,添加200.00 mg/L抗生素Cef能促进幼苗生根。MS培养基中添加低量NAA更有利于甘蔗愈伤组织的分化;在促进细胞分裂时KT的效果明显优于6-BA。MS培养基中添加5.00 mg/LNAA和70.00g/L蔗糖能有效促进分化苗生根。利用建立的遗传转化体系可获得286株转冷调节基因Cbcor15a的甘蔗转化植株;选取83株通过PPT抗性筛选后长势良好的转化植株进行阳性检测,其中有4株呈阳性。【结论】利用农杆菌介导的Cbcor15a基因转化甘蔗的遗传转化体系能成功将Cbcor15a基因整合到甘蔗基因组。
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蝴蝶兰·文心兰遗传转化体系的初步研究
《安徽农业科学 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：[目的]优化蝴蝶兰和文心兰的遗传转化条件。[方法]以培养3周的蝴蝶兰原球茎和文心兰愈伤组织为试材,以大肠杆菌为生长培养基,研究3种农杆菌菌株的侵染力,以及菌液浓度、侵染时间、酚类诱导物(AS)和共培养时间对转化的影响。[结果]以蝴蝶兰原球茎为农杆菌介导的外植体进行遗传转化的优化条件为:预培养时间3d,菌液侵染浓度OD600=0.3,菌液侵染时间10min,pH值5.4,菌液侵染后,与农杆菌共培养5d并添加100μmol/LAS,此条件下的瞬间表达率最高。将蝴蝶兰遗传转化的条件运用于文心兰,得到的转化率较低。3种农杆菌菌株中,EHA105菌株侵染力最强,其次是AGL1,LBA4404最弱。[结论]该研究为进一步研究蝴蝶兰和文心兰的遗传转化体系提供理论依据。
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CMV-Pf-CP基因表达载体的构建及转化西番莲(Passiflora edulis)的研究
《西南农业学报 》 2001 CSCD
摘要：以黄瓜花叶病毒 (Cucumbermosaicvirus ,CMV )西番莲分离物的外壳蛋白基因(CMV Pf CP)为目的基因 ,插入 pBI12 1质粒 35S启动子后 ,构建了植物表达载体 pBIC ;以子叶和胚轴为外植体 ,初步建立了西番莲转基因体系 ,采用土壤根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导法进行西番莲转化研究 ,获得了抗卡那霉素的转基因再生植株。通过对所获得的再生植株进行PCR扩增检测 ,结果表明CMV -Pf -CP基因已导入西番莲植株中。
关键词： 西番莲 黄瓜花叶病毒 外壳蛋白基因 农杆菌介导 转基因
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