富集宏基因组DNA中α淀粉酶全长基因的克隆及重组表达

曾丽娟; 廖思明; 王青艳; 杜丽琴; 韦宇拓; 黄日波; 《中国生物工程杂志 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：利用反向-巢式PCR(IN-PCR)从富集土壤宏基因组DNA中克隆到一种α-淀粉酶基因的全序列,其基因登录号为GU045523,测序分析显示与来自Bacillussp.KR-8104耐酸淀粉酶不完整基因同源性为99%。将获得的α-淀粉酶成熟肽基因与表达载体pSE380连接,导入Escherichia coliJM109中,IPTG诱导表达。粗酶液经Ni-NTA、SephacrylS-200纯化后测定酶学性质:重组酶GXAA的最适作用pH为7.0,最适作用温度为75℃,对可溶性淀粉的Km值为11.6g/L。构建突变子E27G、A450T、E27G-A450T,其酶学性质与原始酶没有显著差别。

关键词： 宏基因组 反向-巢式PCR 侧翼序列 α-淀粉酶