科研产出
产纤维素酶大肠杆菌工程菌的构建和酶的表达
《基因组学与应用生物学 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为了使大肠杆菌(Escherichia coli)具备生产纤维素酶的能力,从铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PKC-001克隆碱性纤维素酶基因,进行密码子优化后连到载体pET-22b,转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,对工程菌进行表达优化并分析纤维素酶酶活.结果表明大肠杆菌工程菌能生产分子量约39 kD的纤维素酶,在培养温度20℃、摇床转速170 r/min、IPTG终浓度0.01 mmol/L的条件下,纤维素酶的产量最大;在酸性条件下,细胞内和细胞外的滤纸酶活力(FPA)分别为5.78 U/mL和1.13 U/mL,在碱性条件下检测不到滤纸酶活.显然,重组纤维素酶仅在酸性条件下有活力.
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基因astE调控微生物抵御丁醇胁迫的生理机制解析
《基因组学与应用生物学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：探究敲除精氨酸代谢途径关键酶ast E对大肠杆菌抵御丁醇胁迫能力的影响。借助氨基酸分析仪全面分析ast E基因敲除对细胞内外游离氨基酸水平的变化。同时,通过测定ast E缺失突变株抵御丁醇和酸胁迫的能力,并分析两者之间的联系。研究表明:与对照菌株BW25113相比,突变株△ast E抵御丁醇胁迫和酸胁迫的能力显著提高,分别提高了30%(8 g/L丁醇)和54.5%(p H 3.0)。同时,通过胞内外氨基酸分析发现,高浓度丁醇胁迫可抑制BW25113和△ast E合成谷氨酸的能力,使其浓度分别降低73.6%和89.1%。在此基础上,外源添加精氨酸实验表明:适量精氨酸能有效提高细胞抵御高浓度丁醇胁迫的能力。敲除精氨酸代谢途径关键酶ast E可显著提高大肠杆菌抵御丁醇胁迫的能力,且其调控机制与耐酸胁迫密切相关。
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产丁醇大肠杆菌工程菌的构建
《广西科学 》 2014
摘要：【目的】为了在大肠杆菌(Escherichia coli)中导入改良的丁醇合成途径,使非生产菌株大肠杆菌具备产丁醇的能力。【方法】克隆大肠杆菌乙酰转移酶基因atoB和丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)丁醇合成途径关键酶基因(crt、hbd、adhE),构建多顺反子表达质粒pSE380-atoB-adhE-crt-hbd;克隆齿垢密螺旋体(Treponema denticola)反式烯酰辅酶A还原酶基因ter,构建表达质粒pSTV29-ter,并将双质粒导入到大肠杆菌。【结果】构建的工程菌能半厌氧发酵产微量丁醇,产量为0.08g/L。【结论】大肠杆菌中的丁醇合成途径导入成功,构建了产丁醇的大肠杆菌工程菌。
关键词： 正丁醇 大肠杆菌 丙酮丁醇梭菌 齿垢密螺旋体 半厌氧发酵
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厌氧梭菌表达载体在大肠杆菌中的直接表达及活性筛选
《应用与环境生物学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：厌氧微生物的代谢途径改造、重组基因表达等分子生物学操作步骤多,易造成氧气接触,从而导致厌氧微生物死亡.针对厌氧梭菌-大肠杆菌穿梭载体的构建和筛选问题,利用纤维素内切酶基因Cphy3367作为报告基因,分析穿梭载体的硫解酶启动子在大肠杆菌中启动基因转录表达的可能性.含有重组质粒pSOS95-Cphy3367的大肠杆菌菌株相对于对照菌株生长迟缓,生物量降低.实时定量PCR检测及重组蛋白酶活检测结果中,发现硫解酶启动子在大肠杆菌中能启动基因转录表达,在37℃温度下48 h后达到高峰.表明硫解酶启动子在大肠杆菌中可以被宿主识别和启动基因表达,基因可以翻译成为蛋白质.在厌氧梭菌的穿梭载体构建中,含有硫解酶启动子的载体可以在大肠杆菌中进行重组载体的活性筛选这个步骤,从而降低梭菌厌氧操作的复杂度和难度.
关键词： 厌氧梭菌 硫解酶启动子 大肠杆菌 重组表达 纤维素酶 菌株筛选
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大肠杆菌astE、rph基因敲除突变株的构建
《生物技术 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：目的:分别构建大肠杆菌astE、rph基因敲除突变株,并检测其异丁醇耐受性的变化。方法:利用Red重组系统分别敲除大肠杆菌的astE和rph基因,并对所获得的突变株进行异丁醇耐受性相关实验研究。结果:成功构建了astE基因缺失突变株△astE和rph基因缺失突变株Δrph,发现两种突变株的异丁醇耐受性均有所提高。结论:通过缺陷菌株的构建,为未来进一步代谢改造生产异丁醇和研究异丁醇耐受机制奠定了基础。
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大肠杆菌中表达关键基因产异丁醇的研究
《生物技术 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：目的:改造大肠杆菌的代谢途径,使非生产菌株大肠杆菌具备产异丁醇的能力。方法:将乳脂乳球菌NIZO B1157的2-酮酸脱羧酶基因kdcA克隆到大肠杆菌中,使大肠杆菌产异丁醇;另外,采取两种方法过量表达alsS、ilvC、ilvD基因,增加前体物质酮酸的供应,以提高异丁醇的产量:一是与kdcA串联表达;二是在另一个相容质粒中表达。结果:大肠杆菌工程菌具备产异丁醇的能力,其中相关基因在一个质粒中串联表达的产量比其在两个相容质粒中共表达的产量高30倍,达到3g/L。结论:导入的酮酸合成途径与醇类生产途径结合,能使非生产菌株大肠杆菌生产异丁醇,并且单质粒表达代谢途径相关基因的效果优于双质粒表达。
关键词： 大肠杆菌 异丁醇 kdcA 双质粒 共表达 单质粒
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日晒消毒对温室土壤粪便性细菌污染的控制(英文)
《广西农业科学 》 2009
摘要：农业土壤一旦被粪便性病菌污染,将给人类带来潜在的感染病菌的风险。通过选择大肠杆菌作为粪便性病菌的模式菌接种于土壤中,在温室条件下采用日晒热消毒法对大肠杆菌进行灭菌试验,探讨日晒消毒法的生物安全控制效果。结果表明,日晒处理使土壤温度在1周内升至40℃,并在大部分处理时期维持在40～46℃;处理区土壤中的大肠杆菌数在1周内从105cfu/g干土降至检测限以下(<0.08cfu/g干土),而对照区土壤中的大肠杆菌数在4周后仍可被检测出。由此可知,温室土壤在因施用未腐熟堆肥或动物粪便而被病菌污染时,日晒消毒是快速有效的生物安全控制手段。
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大肠杆菌海藻糖磷酸合酶基因的克隆
《广西农业生物科学 》 2002 CSCD
摘要：根据报道的大肠杆菌 (Escherichia coli)海藻糖 6磷酸合酶基因 (ots A) ,设计引物 ,通过 PCR技术从大肠杆菌 XLI菌株的总 DNA中扩增到一个 1 .4kb的片段。经克隆、测序分析 ,该片段长 1 42 5 bp并含一完整的开放读框 (ORF)。在核苷酸水平上 ,该 ORF与已报道的 ots A基因具有 99.86%的同源性。在氨基酸水平上 ,其推断性的编码产物蛋白与 Ots A具有 1 0 0 %一致性
关键词： 大肠杆菌 海藻糖6磷酸合酶基因 克隆
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