香蕉磷脂酶D的纯化与生化特性分析

何雪梅; 唐雅园; 孙健; 李丽; 向昱; 杨兆杏; 赵承刚; 韦珍; 唐杰; 《西南农业学报 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：【目的】分离纯化香蕉磷脂酶D（PLD）并分析其生化特性,为深入研究香蕉PLD打下基础。【方法】采用硫酸铵沉淀结合柱层析法对香蕉PLD粗酶液进行纯化,考察反应体系中香蕉PLD蛋白含量、Ca²⁺浓度、pH和反应时间对PLD活性的影响,明确PLD的生化特性。【结果】80%硫酸铵沉淀结合DEAE-sepharose CL-6B阴离子交换柱、Hitrap SP HP阳离子交换柱和Sephadex G-200凝胶层析柱,可将香蕉PLD粗酶液纯化58.74倍,达到电泳纯,香蕉PLD的相对分子量约为43 kD;香蕉PLD活性最佳测定条件为:PLD蛋白含量30.00μg、Ca²⁺浓度1.20 mmol/L、反应15.00 min、pH 6.5,确定香蕉PLD具有较强亲和力和较高催化活性。【结论】硫酸铵沉淀结合柱层析分离技术适用于香蕉PLD纯化,在PLD蛋白含量30.00μg、Ca²⁺浓度1.20 mmol/L、反应15.00 min及pH 6.5条件下,香蕉PLD活性最高。

关键词： 香蕉 磷脂酶D 分离纯化 生化特性