一个外切菊粉酶基因的克隆表达及酶学性质

王成华; 陆雁; 王青艳; 申乃坤; 黄日波; 《生物加工过程 》 2013 CSCD

摘要：从马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)DSM 5418中克隆出外切菊粉酶(INU)的成熟肽编码区域,在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中实现了高效分泌表达,体积酶活力达到15.27 U/mL,进一步对重组酶进行了纯化与表征。经过(NH4)2SO4沉淀、透析和分子筛过滤后,得到了纯度大于95%的纯化重组酶,SDS-PAGE分析发现INU的表观相对分子质量为9.0×104,大于理论预测值6.0×104。纯化酶液的表征结果表明,INU的最适温度和最适pH分别为55℃和5.0,在此条件下INU对菊粉的Km值和比酶活分别为1.90 mmol/L和433.86 U/mg,对蔗糖的Km值和比酶活分别为27.81 mmol/L和1 249.49 U/mg,I/S值为0.34;HPLC分析表明,INU酶解菊粉的产物由果糖和葡萄糖组成;金属离子Mn2+、Fe3+、K+和Co2+对酶有促进作用,而Zn2+、Cu2+、Ni2+、SDS和EDTA对酶活力有不同程度的抑制作用。

关键词： 菊粉酶 表达 马克斯克鲁维酵母 毕赤酵母