科研产出
香蕉MaWRKY28基因的克隆及其功能分析
《分子植物育种 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：为探究香蕉WRKY28基因响应Foc-TR4侵染的作用及调节机制,本研究从抗病'桂蕉9号'品种中克隆了香蕉MaWRKY28基因;利用ExPASy、MEGA 6.0等软件对其蛋白序列进行理化性质分析及系统进化树的构建;采用q RT-PCR分析了该基因在抗('桂蕉9号')、感('威廉斯')香蕉品种受Foc-TR4侵染不同时间后的表达量变化;构建过表达MaWRKY28基因载体,转化拟南芥,并检测该基因在转化植株中的表达量.结果表明,从'桂蕉9号'中克隆了一个WRKY28基因,命名为MaWRKY28 (GenBank登录号为MK941141).MaWRKY28基因编码区全长999 bp,编码332个氨基酸,属于不稳定的分泌蛋白,具有典型的WRKY结构域;系统进化树分析表明,香蕉与海枣(Phoenix dactylifera)、油棕(Elaeis guineensis)的同源性最高,相似性高达87%;qRT-PCR结果显示,在Foc-TR4侵染的香蕉根系过程中,MaWRKY28基因呈上调表达趋势,且在抗病品种中的表达量整体高于感病品种;筛选获得的7株阳性转化拟南芥植株中,MaWRKY28基因的相对表达量较野生型均显著提高.综上说明,MaWRKY28基因在香蕉抗枯萎病菌侵染过程中参与了抗病相关过程,且能在异源受体拟南芥中成功转化并高效表达.本研究结果为进一步研究香蕉抗病品种的抗性机理提供了帮助.
关键词： 香蕉(Musa acuminata) MaWRKY28 抗病性 转基因
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水稻OsTFL2基因启动子的克隆及功能验证
《南方农业学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆水稻TFL2(OsTFL2)启动子序列,并分析其结构和功能,为深入研究OsTFL2基因对水稻开花和花发育的调控机理提供理论参考。【方法】采用同源克隆方法克隆OsTFL2基因启动子序列,利用PLACE和PlantCARE分析其结构和功能,并将其连接至携带β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因的pCAMBIA1301载体以构建pCAMBIA1301-Promoter植物表达载体,通过农杆菌介导转化水稻品种农垦58愈伤组织,通过对转基因植株进行GUS组织化学染色以分析该基因启动子的表达特性和调控功能。【结果】克隆获得的OsTFL2基因起始密码子上游启动子序列1.8 kb,该序列除含有真核生物典型启动子元件TATA-box和CAAT-box外,还含有花粉特异识别的顺式作用元件Pollen1lelat52(AGAAA)、开花基因转录相关的多功能转录因子CACTFTPPCA1(PACT,Y=C/T)、CCAAT box1(CCAAT)、DOFCORE(AAAG)和GATA box(GATA)、分生组织特异性元件CCGTCC-box及多个光诱导元件或光诱导相关元件如G-box、Box I、CATT-motif、GATA-motif和GT1-motif等,推测OsTFL2基因通过上述作用元件参与调控水稻花发育及开花。通过PCR检测共筛选获得16株阳性转基因植株,对其进行GUS组织化学染色,结果发现水稻的外颖、花、花药、柱头和子房中均可检测到明显的GUS色斑,而在叶片、茎尖和根尖无明显的GUS色斑,说明OsTFL2启动子能驱动GUS基因在水稻外颖、花药和子房中表达。【结论】OsTFL2基因启动子具有启动活性和组织表达特异性,可在一定程度上影响OsTFL2基因表达,对水稻花生长发育和开花发挥重要调控作用。
关键词： 水稻 开花 TFL2基因 启动子 转基因 GUS染色
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高山离子芥冷诱导基因转化甘蔗二元植物表达载体构建
《南方农业学报 》 2012 CSCD
摘要：【目的】利用载体重组技术分别将高山离子芥冷诱导基因(Cbcor15a)和报告基因eGFP插入载体pCambia1300-bar,并引入玉米泛素基因启动子UBi-1代替载体本身启动子CaMV35s,重组为适合甘蔗转基因的二元植物表达载体pCambia1300-cbcor15a-bar。【方法】参照pCambia1300-bar载体多克隆位点和基因Cbcor15a、eGFP和启动子UBi-1的核苷酸序列设计引物,通过载体重组技术将基因和启动子分别插入相应的位点。利用基因枪分别将pCambia1300-bar载体和重组载体导入洋葱表皮细胞,用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察。【结果】与导入pCambia1300-bar载体的洋葱表皮细胞相比较,导入重组载体pCambia1300-cbcor15a-bar的洋葱表皮细胞内有强烈的绿色荧光信号。【结论】重组甘蔗转基因二元植物表达载体启动子Ubi-1能够调控下游冷诱导基因Cbcor15a和报告基因eGFP的正常高效表达,为外源基因Cbcor15a转化甘蔗提供保障。
关键词： Cbcor15a 甘蔗 转基因 植物表达载体构建 瞬时表达
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DREB/CBF类转录因子研究进展及其在草坪草和牧草抗逆基因工程中的应用
《草业学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：草坪草和牧草是可持续农业的重要组成部分,但它们的生存力、生物量及产量的增长往往受限于各种逆境胁迫因素。作为受多基因控制的数量性状,抗逆性分子基础的研究显得尤为重要。转录因子调控着与逆境相关的多个下游靶基因的表达。其中,DREB/CBF类转录因子能与脱水应答顺式作用元件结合,由DREB1/CBF和DREB2两个亚家族成员组成。前者受低温诱导,后者受干旱诱导。近年来草坪草和牧草的遗传转化技术突飞猛进,通过转化DREB/CBF类转录因子来改良草种的抗逆性是今后草业育种工作的一个重要发展方向。本研究综述了该类转录因子的结构特征及其在植物逆境信号转导中的作用,并对它们在草坪草和牧草抗逆基因工程中的应用作了相关介绍。
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CMV-Pf-CP基因表达载体的构建及转化西番莲(Passiflora edulis)的研究
《西南农业学报 》 2001 CSCD
摘要：以黄瓜花叶病毒 (Cucumbermosaicvirus ,CMV )西番莲分离物的外壳蛋白基因(CMV Pf CP)为目的基因 ,插入 pBI12 1质粒 35S启动子后 ,构建了植物表达载体 pBIC ;以子叶和胚轴为外植体 ,初步建立了西番莲转基因体系 ,采用土壤根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导法进行西番莲转化研究 ,获得了抗卡那霉素的转基因再生植株。通过对所获得的再生植株进行PCR扩增检测 ,结果表明CMV -Pf -CP基因已导入西番莲植株中。
关键词： 西番莲 黄瓜花叶病毒 外壳蛋白基因 农杆菌介导 转基因
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