水稻抗褐飞虱基因Bph3调控蛋白B8AK41的外源表达、纯化及亚细胞定位

卿冬进; 卢柏亦; 彭宇婧; 戴高兴; 陈韦韦; 李经成; 周维永; 黄所生; 潘英华; 黄娟; 邓国富; 《西南农业学报 》 2025 北大核心 CSCD

摘要：【目的】外源表达获得B8AK41蛋白，并检测B8AK41蛋白亚细胞定位，为研究该蛋白在水稻抗褐飞虱上的生物学功能提供基础。【方法】对B8AK41蛋白序列进行跨膜区预测，构建原核表达载体诱导外源蛋白表达，纯化目标蛋白并鉴定蛋白多肽序列；构建双元表达载体并转入水稻原生质体检测蛋白亚细胞定位。【结果】通过对B8AK41蛋白的跨膜结构域分析，发现该蛋白第47～99位氨基酸区域可能存在跨膜结构域，因此选取第100～374位氨基酸进行外源表达蛋白片段。通过SDS-PAGE电泳分析外源表达的B8AK41蛋白，结果显示B8AK41蛋白在28℃IPTG诱导下成功表达，采用亲和层析方法可纯化得到分子量在35～40 kD的His₆-B8AK41-His₆融合蛋白。通过质谱分析纯化得到的蛋白，其中有3条属于B8AK41蛋白的肽段，证明外源表达纯化的B8AK41蛋白完全正确。采用荧光共聚焦显微镜观察到B8AK41蛋白定位在细胞内质网上。【结论】水稻抗褐飞虱基因Bph3的正调控蛋白B8AK41的非跨膜区能够在大肠杆菌中表达，通过亲和层析方法纯化得到融合蛋白His₆-B8AK41-His₆,后续可将B8AK41蛋白用于抗体制备。B8AK41蛋白定位在水稻细胞内质网上，为研究蛋白功能提供基础。

关键词： 水稻 褐飞虱 Bph3基因 B8AK41蛋白 外源表达 亚细胞定位