科研产出
酸碱滴定法优化香蕉磷脂酶A活性测定及炭疽病胁迫下其活性变化研究
《热带作物学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：植物磷脂酶A(phospholipase A,PLA)是细胞膜磷脂代谢中的关键酶，可以催化磷脂分子上多个功能基团发生裂解生成信号分子，参与调节植物生长发育以及环境和生物胁迫，具有重要研究价值。本研究主要考察底物浓度、反应温度、缓冲溶液pH、缓冲溶液体积、反应时间等多种因素对香蕉PLA催化卵磷脂水解活性的影响，从而优化磷脂酶A活性测定方法，进一步根据最佳测定条件研究炭疽病胁迫下香蕉PLA活性的变化趋势。结果表明，酸碱滴定法测定香蕉PLA活性的优化条件：反应体系pH 9，底物浓度为4 g/L，反应温度为55℃，底物为15 mL，酶粗提液为3 mL，提取缓冲液体积与果皮重量的比值（mL/g）为3，反应时间为7 h。在最优条件下对炭疽病胁迫下的香蕉果皮组织进行PLA活性测定，发现果皮的病害程度与PLA活力呈正相关，即随着病害程度加深，PLA活性增大，且远大于对照组。表明PLA活性大小可能与果实的抗性有关，随着果实病害程度加深，PLA活性增大，膜磷脂降解，细胞膜的完整性被破坏，从而导致果实腐烂。本研究明确了一种方便可行的香蕉PLA活性测定方法，为深入研究香蕉PLA的催化作用机制奠定基础。
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香蕉果实MaNPC1基因原核表达及多克隆抗体制备
《南方农业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】对香蕉果实非特异性磷脂酶C基因（MaNPC1）开放阅读框（ORF）进行原核表达,并制备其多克隆抗体,为深入探究MaNPC1在香蕉果实抵御炭疽病中的作用机制提供理论依据。【方法】克隆MaNPC1基因ORF序列,对其进行生物信息学分析及抗原性预测,并通过双酶切法构建其原核表达载体,利用热激法转入大肠杆菌Rosetta 2（DE3）感受态细胞中进行诱导表达,重组蛋白经Ni-NTA树脂层析柱纯化后免疫新西兰兔,以制备多克隆抗体。同时,运用Western blotting和实时荧光定量PCR分别检测香蕉果实贮藏过程中在炭疽病侵染胁迫下MaNPC1蛋白表达水平及MaNPC1基因相对表达量。【结果】重组质粒pGEX-6p-3-MaNPC1经双酶切后得到1650 bp的特异性条带,说明原核表达载体构建成功,将其转入大肠杆菌Rosetta 2（DE3）感受态细胞后成功表达。MaNPC1蛋白分子式为C2747 H4249 N769 O793 S10 ,分子量为61.06 k D,理论等电点（pI）为8.96;丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和丝氨酸含量较高,分别占氨基酸总数的8.7%、8.2%、7.8%和7.7%;不稳定指数为47.14,表明其为不稳定蛋白;蛋白抗原区段丰富且亲水性氨基酸数目明显高于疏水性氨基酸,有利于后续抗体的制备。制备的多克隆抗体效价较高,为1∶2048000。Western blotting检测发现,香蕉果实贮藏过程中MaNPC1蛋白表达水平呈上升—下降—上升的变化趋势;炭疽病侵染组MaNPC1蛋白除贮藏15 d时的表达水平比对照组低外,其他贮藏时间均略高于对照组。实时荧光定量PCR检测结果表明,MaNPC1基因相对表达量在香蕉果实贮藏过程中呈逐渐上升趋势;贮藏315 d,炭疽病侵染组MaNPC1基因相对表达量均显著高于对照组（P<0.05）。【结论】炭疽病侵染能提高MaNPC1蛋白表达水平,故推测MaNPC1蛋白参与香蕉果实抵抗炭疽病侵染。
关键词： 香蕉 MaNPC1基因 原核表达 多克隆抗体 炭疽病 贮藏
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不同种金花茶对炭疽病的自然抗性评价
《中国植保导刊 》 2019 北大核心
摘要：2018年对广西农业科学院花卉研究所种质资源圃收集的15种金花茶叶片炭疽病发病情况进行了系统调查,根据发病率采用聚类分析对金花茶炭疽病自然条件下的抗性进行评价.结果 表明,不同种金花茶对炭疽病抗性差异较大,其发病率在4.07%~81.48%之间.根据发病率进行聚类分析,15个种的抗性水平分为5个类群:第1类群抗性最高,发病率为4.07% ~5.93%,包括毛籽金花茶(Camellia ptilosperm)、弄岗金花茶(C.grandis)和顶生金花茶(C.pingguoensis);第5类群抗性最差,发病率为75.56%~81.48%,包括罗斯曼金花茶(C.rosmannii)和大叶凹脉金花茶(C.impressinervis).根据植株形态学特征以及炭疽病的抗性水平分化分析,凹脉金花茶和显脉金花茶可能分别存在种级水平分类地位以下的分化.
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葡萄与黑痘病菌互作叶片细胞结构观察
《西南农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：对葡萄与黑痘病菌互作过程的叶片细胞结构变化进行观察,探讨葡萄对黑痘病的细胞学抗性机制。以感黑痘病葡萄品种"粉红玫瑰"及抗黑痘病葡萄品种"凌丰"为材料,采用扫描电镜和透射电镜技术,研究"粉红玫瑰"及"凌丰"葡萄与黑痘病菌互作过程的叶片细胞超微结构变化。扫描电镜观测结果表明,"粉红玫瑰"和"凌丰"两品种葡萄叶片的气孔均分布于下表皮;叶片接种96 h后"凌丰"和"粉红玫瑰"叶片上表皮和下表皮均有菌丝分布,但菌丝的密度"粉红玫瑰"高于"凌丰",同一品种中下表皮的高于上表皮。透射电镜观察结果表明,叶片接种96 h后,"凌丰"和"粉红玫瑰"在与黑痘病菌互作过程中,"凌丰"葡萄叶绿体基粒片层模糊,"粉红玫瑰"叶绿体溶解且空泡较多。抗黑痘病葡萄品种和感黑痘病葡萄品种的叶片细胞的超微结构有明显区别,感黑痘病葡萄品种叶绿体受破坏较严重。
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芒果炭疽病菌对咪鲜胺的敏感性检测
《南方农业学报 》 2013 CSCD
摘要：【目的】检测广西芒果炭疽病菌对咪鲜胺的敏感性,为芒果炭疽病的科学防治和药剂的合理使用提供参考。【方法】从广西各芒果产区采集芒果炭疽病病样分离、纯化芒果炭疽病菌菌株,采用菌丝生长速率法测定芒果炭疽病菌对咪鲜胺的敏感性。【结果】共分离获得53株芒果炭疽病菌菌株,53株菌株对咪鲜胺的EC50为0.0244~0.2572mg/L,平均为0.0916mg/L,其中采自凌云县均亭村的菌株LY12的EC50最小(0.0244mg/L),采自田东县平马镇东达村的菌株TD122的EC50(0.2572mg/L)最大,后者为前者的10.5倍。【结论】来自广西主要芒果产区的53株芒果炭疽病菌对咪鲜胺仍具有较高的敏感性,未产生抗药性亚群体,咪鲜胺在生产上仍具有应用前景,但不同菌株的敏感性有一定差异,存在潜在抗性风险。
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青香蕉提取物对三种热带水果炭疽病菌抑制效果的研究
《保鲜与加工 》 2013
摘要：对青香蕉进行冷激(6℃,4 h)和热激(53℃,5 min)处理后,采用不同提取物料状态(干粉、鲜品)、不同提取方法(80%乙醇和冷、热水提取法),研究青香蕉果皮和果肉提取物对香蕉、芒果和番木瓜三种热带水果炭疽病菌的抑制效果,并筛选其最低抑菌浓度(MIC)。结果表明:青香蕉果皮和果肉的80%乙醇提取物对三种水果炭疽病菌均没有抑制效果;鲜品水提物的抑菌作用优于干粉水提物;青香蕉果皮水提物对香蕉炭疽病菌无明显的抑制效果,热激处理能增强果皮冷、热水提物对芒果和番木瓜炭疽病菌的抑制作用。青香蕉果肉水提物对三种水果的炭疽病菌具有微弱的抑制作用,而热激处理可增强果肉冷、热水提物对三种炭疽病菌的抑制作用,其中对香蕉炭疽病菌的抑制作用最强;冷激处理后,只有热水提取物表现出了对三种炭疽病菌的抑制作用。最低抑菌浓度试验结果表明,经热激处理的青香蕉鲜品水提取物对三种病原菌的最低抑菌浓度为10%。本研究结果对于了解香蕉采后病害系统防御机制及果蔬采后生物防治理论的扩展具有理论及现实意义。
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欧亚葡萄品种“V-32”、“V-59”、“V-64”在南宁的种植表现
《广西农业科学 》 2009
摘要：以巨峰葡萄、广西毛葡萄为对照,研究了"V-32""、V-59""、V-64"3个欧亚葡萄品种的生物学特性。结果表明:3个欧亚葡萄品种的物候期与巨峰葡萄基本相近,单株产量均高于巨峰葡萄、广西毛葡萄,可溶性固形物含量均低于巨峰葡萄但高于广西毛葡萄;欧亚葡萄品种"V-32""、V-64"的黑痘病抗性均高于巨峰葡萄,略低于广西毛葡萄。综合分析认为,欧亚葡萄品种"V-32"、"V-64"具有抗病、高产稳产、果汁色泽好等特征,有望开发成为广西酿酒葡萄品种。
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湿热地区不同葡萄品种对黑痘病的抗性分析
《西南农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：采用田间自然鉴定的方法,研究分析了湿热地区28个葡萄栽培品种、7个毛葡萄野生株系对黑痘病的抗性差异。结果表明,欧亚种品种对黑痘病较感病,大部分品种对黑痘病表现为高感;欧美杂交种品种,大部分表现为抗病,有的甚至高抗;毛葡萄与欧亚种的杂交后代属于高抗病品种;而毛葡萄野生株系对黑痘病均表现为免疫。
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