科研产出
厌氧梭菌表达载体在大肠杆菌中的直接表达及活性筛选
《应用与环境生物学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：厌氧微生物的代谢途径改造、重组基因表达等分子生物学操作步骤多,易造成氧气接触,从而导致厌氧微生物死亡.针对厌氧梭菌-大肠杆菌穿梭载体的构建和筛选问题,利用纤维素内切酶基因Cphy3367作为报告基因,分析穿梭载体的硫解酶启动子在大肠杆菌中启动基因转录表达的可能性.含有重组质粒pSOS95-Cphy3367的大肠杆菌菌株相对于对照菌株生长迟缓,生物量降低.实时定量PCR检测及重组蛋白酶活检测结果中,发现硫解酶启动子在大肠杆菌中能启动基因转录表达,在37℃温度下48 h后达到高峰.表明硫解酶启动子在大肠杆菌中可以被宿主识别和启动基因表达,基因可以翻译成为蛋白质.在厌氧梭菌的穿梭载体构建中,含有硫解酶启动子的载体可以在大肠杆菌中进行重组载体的活性筛选这个步骤,从而降低梭菌厌氧操作的复杂度和难度.
关键词： 厌氧梭菌 硫解酶启动子 大肠杆菌 重组表达 纤维素酶 菌株筛选
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瑞氏木霉内切-β-1,4葡聚糖酶基因Egl1的分子改造
《广西科学 》 2011
摘要：为了提高瑞氏木霉(Trichoderma reesei)的纤维素酶活力,用分子改造的方法改造其内切-β-1,4葡聚糖酶基因Egl1。用DNaseⅠ消化Egl1,回收50~200bp的片段,用T4 DNA连接酶连接回收的片段,进行PCR反应,将PCR产物转入瑞氏木霉原生质体,用比较滤纸酶活力的方法筛选纤维素酶活力提高的菌株。结果筛选到2株滤纸酶活力比出发菌株提高的菌株Egl36-4和Egl33-4B2Z2,其酶活力分别比出发菌株提高了2.8倍和3.6倍。
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眉斑并脊天牛纤维素酶性质的研究
《广西科学 》 2011
摘要：为了了解眉斑并脊天牛(Glenea cantor)纤维素酶的性质,选取以木棉树(Bombax ceiba)为食的眉斑并脊天牛为研究对象,按照IUPAC的标准测定方法,测定和定位眉斑并脊天牛肠道中的内切-β-1,4葡聚糖酶、纤维二糖酶以及滤纸酶活力,考察内切-β-1,4葡聚糖酶的最适pH值和最适温度。结果表明:在眉斑并脊天牛肠道中同时存在以上3种纤维素酶,3种纤维素酶都具有酶活力,并且主要集中在天牛肠道的中肠。内切-β-1,4葡聚糖酶具有广泛的pH值和温度适应范围,最适pH值为9.2,最适温度为50℃。
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