科研产出
通过嫁接传染的不同阶段黄龙病对椪柑转录组的影响
《基因组学与应用生物学 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：黄龙病(huanglongbing, HLB)是华南柑橘产区最严重的病害之一,主要通过柑橘木虱和嫁接等方式传播,不同的感病方式对寄主的影响可能有所差别.本研究通过嫁接的方式,研究黄龙病对椪柑在感病早期和发病晚期转录组的影响.在早期(14 wpi),总共有6 467个基因出现了显著差异表达,而在晚期(22 wpi),总共有9 625个基因出现了显著差异表达.对差异表达的基因进行KEGG富集分析,发现14 wpi组的差异表达基因总共有14个通路出现了富集,而22 wpi组的差异表达基因总共有24个通路出现了富集.对8个差异表达的基因进行荧光定量PCR验证,结果表明这些基因在两个阶段的表达变化趋势与转录组的数据基本一致.本研究通过研究黄龙病不同发病阶段的差异基因表达,为探究黄龙病的发病机理提供了一定的理论基础.
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百合鳞茎发育过程中淀粉合成相关酶基因的克隆及表达分析
《广西植物 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：该研究通过同源克隆技术克隆腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)、颗粒结合淀粉合酶(GBSS)和可溶性淀粉合酶(SSS) 3类百合淀粉合成关键酶基因,分析这三类淀粉合成关键酶基因的表达变化,测定百合鳞茎膨大发育中淀粉含量变化。结果表明:(1) AGPase具有GlgC家族蛋白PLN02241蛋白结构特征及cl11394家族蛋白ADP_Glucose_PP与NTP_transferase结构域,获登录号KP751443; GBSS与SSS具有cl10013家族蛋白Glyco_transf_5,GT1_Glycogen_synthase_DULL1_like结构域,获登录号分别为KP751444、KP751445。(2)百合鳞茎形成与膨大发育过程中,淀粉含量呈现递增趋势,鳞茎盘开始分化茎杆时其淀粉含量最高,达到44.52%。鳞茎与叶片部位的三个淀粉合成相关酶基因表达量均逐渐增加;在鳞茎膨大后茎杆分化阶段,三个淀粉合成相关酶基因表达量达到最高,AGPase、GBSS、SSS在鳞片中的表达量分别为10.79,6.92和5.12,叶片中的表达量分别为6.79,5.22和4.41,鳞片中的表达量大幅度高于叶片;淀粉合成相关酶基因的表达量变化与淀粉含量、鳞茎的膨大发育成正相关。这为鳞茎的繁殖生产提供了可通过调节淀粉合成关键酶基因表达促进百合鳞茎膨大发育的思路。
关键词： 百合 淀粉合成 鳞茎膨大 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 荧光定量PCR
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实时荧光定量PCR检测柑橘黄龙病田间试验药剂防治效果
《安徽农业科学 》 2018
摘要：[目的]评价柑橘黄龙病田间试验药剂橘叶青的防控效果。[方法]采用实时荧光定量PCR检测喷施橘叶青后的柑橘叶片和果皮中黄龙病病原菌的含量。[结果]喷施橘叶青后的叶片和果皮组织含菌量明显降低,叶片组织含菌量降低了近35倍,果皮组织含菌量降低了约7倍。[结论]防治药剂橘叶青对柑橘黄龙病具有较好的防控效果,可以有效控制病原菌在柑橘组织中发展。
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水稻苗期感染SRBSDV后赤霉素相关基因表达量及赤霉素含量的变化
《植物保护学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为明确水稻在苗期被南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)浸染后植株体内赤霉素合成相关基因表达量和赤霉素含量的变化情况,利用q RT-PCR技术检测水稻在3叶期感染SRBSDV后的5个时期Os01g0883800、Os03g0856700、Os07g0169700三个赤霉素的生物合成基因表达量;采用高效液相色谱法检测GH998和Y11植株感染SRBSDV后的赤霉素含量;观察GH998病株施用外源赤霉素后病症的缓解效果。结果表明,感染SRBSDV后在GH998叶片中,以在第0天为对照组,Os01g0883800和Os07g0169700相对表达量最大分别下调25.6倍和21.1倍,Os03g0856700在第3天相对表达量下调20.5倍,在第6天上调2.3倍;在茎中,Os01g0883800、Os07g0169700、Os03g0856700的相对表达量在第3天分别下调8.5倍、6.4倍和1.4倍。在Y11叶片中Os01g0883800、Os03g0856700和Os07g0169700相对表达量最大下调分别为6.6倍,42.7倍和16.9倍;在茎中,Os01g0883800、Os07g0169700相对表达量最大下调分别为5.3倍和10.5倍;Os03g0856700在第3天时表达量上调1.5倍,在第12天下调2.8倍。GH998感染SRBSDV后植株体内赤霉素含量显著降低;施用外源赤霉素能缓解SRBSDV部分病症,表现为株高、剑叶长、剑叶宽和根长等均增加。
关键词： 南方水稻黑条矮缩病毒 赤霉素生物合成基因 荧光定量PCR 高效液相色谱 外源赤霉素
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种子传播黄龙病可能性研究
《南方农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探讨带菌种子能否传播黄龙病,为黄龙病防控策略的制定提供科学依据。【方法】采用单管双引物对Taq Man探针实时荧光定量PCR(STDP-q PCR)对从感染黄龙病沙田柚树上收集的种子进行黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asi-aticus,Las)检测,观察播种的沙田柚种子萌发生长情况,并用STDP-q PCR对萌发的幼苗进行Las检测。【结果】两份种子样品均能检测到Las。播种的108颗种子共萌发91颗(84.3%),部分沙田柚苗在生长初期表现叶片畸形或黄化症状,但随后恢复正常。由种子萌发而来的沙田柚苗经30、60、90、180和360 d生长后取样检测,均未检测出Las。【结论】黄龙病通过带菌种子进行传播缺乏证据。
关键词： 黄龙病 黄龙病菌亚洲种 种子传播 实时荧光定量PCR
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西瓜与枯萎病菌非亲和互作相关基因的分离及表达分析
《植物病理学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：从整体水平阐明西瓜对西瓜枯萎病菌1号生理小种的抗病分子机制和抗病相关基因的表达特征,以高抗枯萎病菌1号生理小种的西瓜品种"卡红(Calhoun Gray)"为试材,接种西瓜枯萎病菌和蒸馏水的根尖组织作为测验方(Tester)和驱动方(Driver),构建西瓜枯萎病菌胁迫的SSH-c DNA正向文库。利用反向Northern斑点杂交技术对文库中克隆进行杂交筛选。随机测序300个阳性克隆,序列比对分析,利用RT-PCR技术分析抗病相关基因的表达特性。259条EST成功测序,167条与已知基因具有较高的同源性,占全部ESTs的65.5%,其中与抗病和防卫相关的有64条23种,占24.7%;卡红对枯萎病菌1号生理小种的抗性相关基因主要涉及抗病信号传导、抗病防卫、转录因子、次生代谢合成和细胞保护等方面;Aquaporin和Peroxidase基因在接种后表达量均增加。Calhoun Gray对枯萎病菌侵染作出的反应是全方位多方面的,抗病相关基因主要集中在系统获得性抗性反应中,获得了一些Calhoun Gray与野生西瓜PI296341在与枯萎病生理小种1互作中差异表达的基因,为深入研究西瓜与枯萎病菌互作的分子机制以及关键基因的功能分析奠定基础。
关键词： 西瓜 枯萎病 抑制消减杂交 表达序列标签 RT-PCR
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褐飞虱热胁迫下内参基因的筛选及热激蛋白基因表达分析（英文）
《昆虫学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：【目的】褐飞虱Nilaparvata lugens(Stl)是为害水稻的重要害虫之一,温度是影响其暴发、迁飞的主要环境因子之一。本研究旨在探讨研究褐飞虱对高温胁迫适应性的热激蛋白基因表达调控模式。【方法】分别以不同的高温(30℃~40℃)处理褐飞虱雌、雄虫1 h和2 h,利用荧光定量PCR技术检测其体内的β-actin 1,β-actin2,β-actin3,28S rRNA,18S rRNA和α-2-tubulin 6个内参基因的表达量,用geN orm和BestK eeper软件分析确定最稳定表达的内参基因,并检测热胁迫后hsp70和hsp90基因在处理褐飞虱成虫体内的表达模式。【结果】geN orm软件分析结果表明,热胁迫后褐飞虱内参基因稳定性在雌虫体内为:β-actin1=β-actin3>28S rRNA>α-2-tubulin>18S rRNA>β-actin2;在雄虫体内为:β-actin1=β-actin3>α-2-tubulin>28S rRNA>18S rRNA>β-actin2。BestK eeper软件分析结果显示,在热胁迫的雌、雄虫体内β-actin1均最稳定,18S rRNA次之,β-actin2最不稳定。两种软件分析结果基本一致。以β-actin1为校正内参基因,荧光定量PCR分析hsp70和hsp90在不同热胁迫条件下的表达模式,结果表明,各高温处理下hsp70表达量与对照26℃下的表达量没有显著性差异;而hsp90基因表达模式表现为被高温诱导上调表达,在雌、雄虫体内表达量达到最高的处理条件分别为40℃和38℃处理2 h。【结论】β-actin1基因可以作为热胁迫下褐飞虱雌雄虫体内基因表达模式分析的校正内参基因使用。褐飞虱hsp90基因能被高温诱导表达,该基因可能在褐飞虱适应热胁迫过程中起着重要的作用。
关键词： 褐飞虱 热激蛋白 表达模式 内参基因 荧光定量PCR
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广西蔗区甘蔗花叶病病毒种群分析
《南方农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确引起广西蔗区甘蔗花叶病的病原,为甘蔗抗花叶病育种、种质筛选及病害防控提供科学依据。【方法】从广西主要蔗区采集不同品种显症或不显症甘蔗叶片,提取RNA后采用甘蔗花叶病毒(SCMV)、高粱花叶病毒(Sr MV)、玉米矮化病毒(MDMV)和约翰逊草花叶病毒(JGMV)特异引物进行一步法RT-PCR检测,将目的片段克隆并测序;病毒CP基因序列在Gen Bank数据库中进行比对分析。【结果】在收集的48份样品中检测出Sr MV阳性33份,SCMV阳性2份,SCMV和Sr MV复合侵染1份,未检测到MDMV和JGMV。花叶病的发病率为75.0%,其中,Sr MV、SCMV及两种病毒复合侵染的发病率分别为68.8%、4.2%和2.1%。台糖系列及其他引进品种的甘蔗花叶病感病率较高,桂糖系列品种的感病率相对较低。【结论】甘蔗花叶病已在广西大部分蔗区发生,其致病原以Sr MV为主,SCMV零星发生,由SCMV和Sr MV复合侵染的甘蔗花叶病发生机率较低。广西蔗区可能存在其他种类病原病毒引起的甘蔗花叶病。
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柑橘花器和种子中黄龙病菌的定量分布及应用
《植物保护学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为准确、快速测定感病柑橘花器和种子中黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,Las)的含量,比较了SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(SGI-qPCR)和单管双引物对TaqMan探针qPCR(STDP-qPCR)的检测灵敏度,并用STDP-qPCR法定量检测了感病沙田柚花器和种子中的Las。结果显示,STDP-qPCR检测灵敏度为1×100拷贝/μL,比SGI-qPCR高100倍;花器中的雄蕊、花瓣、雌蕊和花粉等组织,以及种子的种皮和胚乳组织中均可检测到Las,但含量差异较大,其中种皮组织中Las含量最高,达到109842个细胞/μg DNA,花粉中的Las含量最低,为308个细胞/μg DNA,所有种壳中均未检测到Las;基于雄蕊组织的黄龙病分子诊断准确率达93.8%。表明Las在感病柑橘花器和种子中呈不均匀分布,基于雄蕊组织的黄龙病诊断方法可辅助用于该病害的高通量检测。
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岩溶地貌部位对土壤微生物丰度与酶活性的影响
《水土保持通报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以中国地质科学院岩溶地质研究所桂林丫吉岩溶试验场为研究区,单氨加氧酶的编码基因amoA的部分序列作为氨氧化细菌(AOB)指示基因,利用荧光定量PCR技术,结合平板菌落计数法和土壤酶活性测定,探讨了岩溶地貌部位及土壤成因对微生物群落丰度和酶活性的影响。结果发现,受岩溶地貌部位和土壤成因的影响,土壤酶活性、土壤微生物总数在垭口、坡地、洼地呈增加的趋势,而氨氧化细菌丰度则呈现降低的趋势。结果表明,土壤氨氧化细菌丰度与真菌数呈极其显著的正相关,而与蔗糖酶活性呈极其显著负相关。
关键词： 岩溶地貌 酶活性 微生物群落丰度 荧光定量PCR 氨氧化细菌
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