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百合AGPase基因RNAi载体构建及遗传转化研究

文献类型： 中文期刊

作者： 张进忠 1 ; 孙嘉曼 1 ; 李朝生 1 ; 刘挺燕 1 ; 范燕萍 1 ;

作者机构： 1.华南农业大学林学与风景园林学院;广西农业科学院生物技术研究所;广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室

关键词： 百合;AGPase基因;RNA干扰;载体构建;遗传转化

期刊名称： 西南农业学报

ISSN： 1001-4829

年卷期： 2018 年 06 期

页码： 1097-1103

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】AGPase基因可在百合鳞茎膨大发育过程中影响淀粉的合成代谢,从而调控鳞茎发育,构建干扰AGPase基因RNAi载体并遗传转化进行反向下调作用研究,可为该调控机制的研究提供更多信息。【方法】克隆300 bp的AGPase基因保守序列,利用Gateway技术通过BP反应将该序列插入入门载体p DONR221,进行LR反应将该序列正反向插入干扰载体p Jawohl8-RNAi中,经过酶切鉴定所构建RNAi载体的正确性;并通过农杆菌介导法转入百合组培苗中,PCR检测RNAi载体转化农杆菌,荧光定量PCR检测农杆菌转化植株的AGPase相对表达量变化。【结果】成功构建p DONR221-AGPase入门克隆与p Jawohl8-RNAi-AGPase表达载体,遗传转化百合愈伤诱导出AGPase表达量下调的转化植株。【结论】采用Gateway技术可方便构建RNAi表达载体,选择的AGPase保守序列能作为干扰片段对百合AGPase自身转录的mRNA进行下调。

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