文献类型： 中文期刊

作者： 卢福芝 ¹ ; 曾丽娟 ¹ ; 朱绮霞 ² ; 张搏 ² ; 韦宇拓 ¹ ; 黄日波 ¹ ;

作者机构： 1.广西大学生命科学与技术学院

2.广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心

关键词： 酿酒酵母;脂肪酶;基因克隆;毕赤酵母;表达

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2010 年 20 卷 03 期

页码： 20-22

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:克隆Saccharomy cescerevisiae脂肪酶基因,并实现其在Pichia pastoris中高效表达。方法:根据NCBIGenBank中已公布的Saccharomyces cerevisiae脂肪酶基因TGL3设计引物,以Saccharomyces cerevisiae总DNA为模板,PCR扩增目的片段,构建重组子pPIC9K-TGL3,转化到Pichia pastoris GS115。结果:扩增得到1929bp的基因片段,与GenBank中公布的序列氨基酸同源性达99.7%,编码的643个氨基酸中有脂肪酶的保守序列GXSXG,位于235～239位。重组子摇瓶发酵120h发酵液上清脂肪酶酶活达到60U/mL,酶学性质研究表明:该酶的最适作用温度为40℃,在25℃～40℃之间能保持60%以上酶活力。最适pH值为8.5,在pH6.5～9.0之间能保持50%以上的酶活力。除Al3+和Fe2+外,该酶不受Ca2+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Mn2+、Ni+、Sr2+等多种金属离子的影响。结论:发酵液上清脂肪酶酶活达到60U/mL,是原菌株的10倍,成功实现了该基因的高效表达。