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环糊精水解酶cds1-3底物通道氨基酸的定点突变研究

文献类型： 中文期刊

作者： 汤宏赤 1 ; 莫莉 1 ; 闭海 1 ; 林丽华 1 ; 郭媛 1 ; 庞浩 1 ;

作者机构： 1.广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心非粮生物质酶解国家重点实验室广西生物炼制重点实验室广西生物科学与技术研究中心

关键词： 环糊精水解酶;同源建模;底物通道;定点突变;蛋白结构;氨基酸

期刊名称： 广西科学

ISSN： 1005-9164

年卷期： 2019 年 004 期

页码： 410-417

摘要： 本研究对具有大分子水解能力的环糊精水解酶cds1-3的蛋白结构进行分析,选取底物通道相关氨基酸进行定点突变.通过比较突变酶和野生酶的功能差异,定位决定cds1-3特殊功能的氨基酸.采用sybyl 1.2进行蛋白质底物结合分析,选取和多聚体形成、底物结合以及底物通道相关的氨基酸Glu66、Pro48、Phe289为突变位点,反向PCR构建pSE380/E66G、pSE380/P48H、pSE380/F289A表达质粒并进行表达,获得酶活突变体并与原始酶进行底物特异性比较分析.其结果显示,突变酶E66G降解大分子底物木薯淀粉和支链淀粉的相对酶活力分别提高26.96%和23.15%,而对小分子底物普鲁兰糖的水解能力下降13.14%.因此,cds1-3是一个能水解大分子底物的特殊环糊精水解酶,氨基酸Glu66是cds1-3水解大分子支链淀粉的关键氨基酸之一.

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