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黑曲霉木聚糖酶基因xynB的克隆及在酿酒酵母中的表达

文献类型： 中文期刊

作者： 陈东 1 ; 曹树威 2 ; 昊仁智 1 ; 黄日波 2 ;

作者机构： 1.广西科学院非粮生物质酶解国家重点实验室

2.广西大学生命科学与技术学院

关键词： 木聚糖酶;黑曲霉;酿酒酵母

期刊名称： 广西科学

ISSN： 1005-9164

年卷期： 2013 年 20 卷 02 期

页码： 148-151，157

摘要： 从黑曲霉(Aspergillus niger)克隆木聚糖酶基因xynB,利用重叠延伸PCR法去除其中的内含子。将该基因与质粒pYES2连接,构建真核表达载体,用醋酸锂化转法导入酿酒酵母(Sacharomyces cerevisiae)INVSC1菌株表达。利用α信号肽替换基因原信号肽,以考察信号肽对表达蛋白分泌的影响。结果获得2株重组菌株,分别为xynB连接原信号肽的pYES2-xynB菌株和xynB连接α信号肽的pYES2-xynB-α菌株。木聚糖酶B成功表达,SDS-PAGE检测到约24kDa目的蛋白质条带。木聚糖酶B最适催化温度为50℃,最适催化pH值为5.0,Mn2+对酶活具有强烈的抑制作用。将α信号肽取代原信号肽使酶活达到最高的诱导时间由72h缩短为48h,但是置换信号肽使最高酶活由7.59U降低为3.97U。

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