您好，欢迎访问广西农业科学院 机构知识库！

温泉土壤宏基因组文库构建及普鲁兰酶筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 杜丽琴 1 ; 庞浩 2 ; 马贵 1 ; 韦宇拓 1 ; 黄日波 2 ;

作者机构： 1.广西大学生命科学与技术学院/广西亚热带生物资源保护利用重点实验室

2.广西科学院/国家非粮生物质能源工程技术研究中心

关键词： 普鲁兰酶;宏基因组;16S rRNA;DNA文库;温泉土壤

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2014 年 45 卷 05 期

页码： 725-730

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】构建温泉土壤宏基因组文库并进行普鲁兰酶活性筛选,以期获得高活力、耐高温的新型普鲁兰酶基因。【方法】采用间接法提取温泉土壤样品中宏基因组DNA,经SephadexG200(含2%PVPP)凝胶柱和电洗脱两步纯化后,扩增16SrRNA序列,通过序列比对和系统发育进化树分析温泉土壤微生物的多样性;然后以pCC1FOS为载体构建温泉土壤宏基因组文库,并对所获得的宏基因组文库进行活性筛选。【结果】利用宏基因组技术提取温泉土壤样品中微生物的基因组DNA,构建了一个约含1146个克隆的温泉土壤16S rRNA文库,经遗传进化分析,发现温泉土壤样品中的大部分微生物未被研究过,主要来源于厚壁菌门(Firmicutes),其次为恐球菌—栖热菌门(Deinococcus-Thermus)和变形杆菌门(Proteobacteria)。用提取获得的宏基因组DNA成功构建了温泉土壤微生物宏基因组Fosmid文库,文库约含2.7万个克隆,平均插入片段长度为40.0 kb,文库外源DNA总容量为1.2×109bp;通过活性筛选共获得9个可表达普鲁兰酶活性的克隆。【结论】宏基因组文库技术是获取极端环境微生物新酶的有效手段,可为进一步挖掘普鲁兰酶的应用潜力及研究其耐热机理奠定基础。

  • 相关文献

[1]蔗糖富集环境土壤微生物宏基因组分析及蔗糖水解相关酶基因克隆. 庞浩,胡媛媛,韦宇拓,黄日波. 2010

[2]重组枯草芽孢杆菌发酵廉价原料生产普鲁兰酶. 李检秀,刘祺霞,陈先锐,李晓明. 2016

[3]Bacillius naganoensis普鲁兰酶基因的分子改造及酶学性质研究. 谢能中,曹薇,王青艳,米慧芝. 2014

[4]产普鲁兰酶克雷伯氏菌的分离鉴定及酶学性质研究. 王青艳,米慧芝,朱绮霞,秦艳,曹薇,朱婧,陆雁,黄日波. 2013

[5]辛烯基琥珀酸直链淀粉酯的性质及应用研究. 郑为完,孔令伟,涂宗财,廖和菁,龙吉云,王振兴. 2011

[6]宏基因组中不依赖辅酶B_(12)甘油脱水酶基因的筛选和表达. 陈云来,吴杰群,韦宇拓,杜丽琴,黄日波. 2013

[7]富集宏基因组DNA中α淀粉酶全长基因的克隆及重组表达. 曾丽娟,廖思明,王青艳,杜丽琴,韦宇拓,黄日波. 2010

作者其他论文 更多>>
置顶
购物车
反馈

© 京ICP备09089781号-29 主办单位：广西农业科学院

学术资源： 中国农业科学院 农业专业知识服务系统 农科联盟资源共建共享平台 中国农业科技文献与信息服务平台 中国农业期刊集成服务平台