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粘质沙雷氏菌脂肪酶基因的克隆表达和酶学性质的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 陈英 1 ; 张搏 2 ; 黄日波 2 ;

作者机构： 1.广西大学生命科学与技术学院

2.广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心

关键词： 粘质沙雷氏菌;脂肪酶;克隆;表达

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2010 年 20 卷 05 期

页码： 12-16

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:克隆粘质沙雷氏菌脂肪酶基因(lipA)使其在大肠杆菌BL21(DE3)中实现高效表达,并对重组酶进行酶学性质研究。方法:以产脂肪酶粘质沙雷氏菌总DNA为模板,PCR扩增脂肪酶基因lipA,构建重组表达载体pET-lipA,并将其导入大肠杆菌进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和酶学性质的测定。结果:经过优化培养条件,脂肪酶活力最高能达到104U/mL。重组脂肪酶的最适反应温度为40～45℃,最适pH为7.0～7.5,在50℃保温1h下仍能保持80%的酶活力,Ca2+、Sr2+、Mn2+和Mg2+对脂肪酶酶活有较强的激活作用,尤其是Ca2+使脂肪酶酶活提高了1倍多,而Ni2+、Fe2+、Fe3+、Cu2+、Zn2+和Al3+对酶活具有较强的抑制作用,尤其是Zn2+和Al3+使酶活力几乎完全丧失。该酶对一些有机溶剂有较好的耐受性,与50%甲醇混合24h,仍能保持84%的酶活力。结论:该脂肪酶具有较好的热稳定性和甲醇耐受力,作为生产生物柴油的催化剂具有很大的应用价值,为基因工程酶法生产生物柴油打下良好的基础。

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