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拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件优化

文献类型： 中文期刊

作者： 付岗 1 ; 叶云峰 2 ; 杨迪 1 ; 张晋 1 ; 潘连富 1 ; 吴礼和 ; 王维 1 ;

作者机构： 1.广西农业科学院微生物研究所

2.广西农业科学院园艺研究所

关键词： 哈茨木霉;gz-2菌株;原生质体;绿色荧光蛋白;标记技术

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2017 年 48 卷 10 期

页码： 1817-1823

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】优化拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件,快速、高效获得绿色荧光标记菌株,为哈茨木霉及同类真菌的GFP标记提供参考,并为下一步研究其在不同环境中的定殖动态、分布规律及生防特性等打下基础。【方法】采用PEG-Ca Cl2介导的原生质体转化体系,从木霉菌株的菌龄、酶解时间、转化体系中质粒的含量及再生培养基中潮霉素B(Hm B)的浓度等方面对哈茨木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件进行优化,获得表达稳定的转化子,并与出发菌株的生长特性进行比较,评价转化效果。【结果】gz-2菌株培养36 h菌丝所形成的原生质体稳定性最好,菌丝体酶解3.5 h获得的原生质体数量最多,达11.67×106个/m L;每240μL转化体系中质粒DNA含量为40μL,得到的转化子数量最多,为8.67个/皿;再生培养基中Hm B含量为600μg/m L时可获得稳定的强转化子。【结论】筛选获得1株表达稳定的转化子GFP-gz-2菌株,该菌株在菌落形态、菌丝生长速率及产孢量上与出发菌株gz-2无显著差异,且具有较好的遗传稳定性。

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