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利用改良RACE方法克隆木薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基基因的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 罗兴录 1 ; 钟建崑 1 ; 陈会鲜 1 ;

作者机构： 1.广西大学农学院

关键词： 木薯;AGPase小亚基基因;克隆;5’端;改良RACE方法

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2014 年 30 卷 27 期

页码： 252-257

收录情况： CSCD

摘要： 首次从木薯中分离克隆出AGPase小亚基的基因5’端cDNA序列,最终为进一步成功获得木薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基基因的cDNA全长序列提供依据。本研究以木薯作为试验材料,设计锚定引物,并根据木薯AGPase小亚基基因已知序列设计PCR特异引物,利用逆转录引物AUP1反转录总RNA,然后分离纯化反转录产物,通过对三大酶促反应(逆转录反应,TdT加尾,巢式及降落PCR技术)的具体改良,并将其与传统方法进行比较。利用改良后方法,首次成功获得木薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基基因5’端cDNA序列。同时,本研究通过对RACE技术的改良与传统方法相比,在操作上更加简单、快速;在序列获得上更加高效;在试验成本上更加低廉。本研究可以高效且快速的成功获得木薯淀粉关键酶AGPase小亚基基因5’端序列,具有一定的实用性及简便性。

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