科研产出
耐硒微生物的筛选及其对硒富集和土壤硒活化能力研究
《土壤通报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】筛选出高耐亚硒酸盐并对土壤硒素活化效率高的微生物资源。【方法】采用稀释平板法分离微生物、含硒平板划线法筛选耐硒菌株，利用16S rDNA基因序列分析鉴定菌株，通过将菌株添加到含硒液体培养基中测定其硒富集率。将菌株添加至富硒土壤中，测定培养前后土壤理化性质变化，评价菌株活化土壤硒的能力。【结果】筛选出两株细菌可耐亚硒酸盐浓度高达500 mmol L-1,16S rDNA鉴定菌株分别为粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens QZB-1）和彭氏变形杆菌（Proteus penneri LAB-1）。在pH=5～10、温度15～40℃、NaCl <10%条件下两株细菌均能生长。两株细菌均具有较高的亚硒酸盐富集率，其中粘质沙雷氏菌完全富集2 mmol L-1 SeO32-仅需18 h。将两株耐硒细菌制成菌悬液添加到土壤中，均能提高土壤pH值和土壤有效硒含量。两株细菌能改变土壤的硒形态分布，降低土壤中有机结合态硒含量，提高水溶态硒和可交换态硒的含量，其中两株细菌混合施用对土壤的水溶态硒和可交换态硒含量的提高最显著。【结论】从广西富硒土壤中筛选出两株高耐亚硒酸盐的微生物，其拥有较高的硒富集和提高土壤硒有效性的能力，可为富硒土壤资源的开发利用提供微生物资源。
关键词： 耐硒菌 粘质沙雷氏菌 彭氏变形杆菌 硒富集 土壤硒活化
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定点突变Ca~(2+)平衡位点对粘质沙雷氏菌脂肪的影响
《基因组学与应用生物学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为了研究粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)脂肪酶lip A中的Ca~(2+)对酶活力的影响,采用定点突变的方法对平衡Ca~(2+)的位点D388进行定点突变,对突变体进行诱导表达后,纯化目的蛋白并进行酶学性质分析。与野生酶相比,突变酶的最适温度由40℃降低到25℃,最适p H值由8.5降到8.0,T_(1/2)值比野生酶提高了2℃。由此可知,该Ca~(2+)对脂肪酶lip A酶学性质有着至关重要的作用。
关键词： 粘质沙雷氏菌 脂肪酶lipA Ca~(2+) 定点突变
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粘质沙雷氏菌脂肪酶基因的克隆表达和酶学性质的研究
《生物技术 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：目的:克隆粘质沙雷氏菌脂肪酶基因(lipA)使其在大肠杆菌BL21(DE3)中实现高效表达,并对重组酶进行酶学性质研究。方法:以产脂肪酶粘质沙雷氏菌总DNA为模板,PCR扩增脂肪酶基因lipA,构建重组表达载体pET-lipA,并将其导入大肠杆菌进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和酶学性质的测定。结果:经过优化培养条件,脂肪酶活力最高能达到104U/mL。重组脂肪酶的最适反应温度为40～45℃,最适pH为7.0～7.5,在50℃保温1h下仍能保持80%的酶活力,Ca2+、Sr2+、Mn2+和Mg2+对脂肪酶酶活有较强的激活作用,尤其是Ca2+使脂肪酶酶活提高了1倍多,而Ni2+、Fe2+、Fe3+、Cu2+、Zn2+和Al3+对酶活具有较强的抑制作用,尤其是Zn2+和Al3+使酶活力几乎完全丧失。该酶对一些有机溶剂有较好的耐受性,与50%甲醇混合24h,仍能保持84%的酶活力。结论:该脂肪酶具有较好的热稳定性和甲醇耐受力,作为生产生物柴油的催化剂具有很大的应用价值,为基因工程酶法生产生物柴油打下良好的基础。
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固定化粘质沙雷氏菌脂肪酶催化制备脂肪酸甲酯
《现代化工 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：将实验室构建的产粘质沙雷氏菌脂肪酶的基因工程菌于20 L发酵罐中发酵,并将分离提取获得的粗脂肪酶液用sol-gel包埋法和大孔吸附树脂吸附两种方法进行固定化,考察了醇油比、含水量、反应温度、反应时间、催化剂用量对生物柴油产率的影响。实验结果显示采用大孔树脂吸附法制备的固定化酶的催化效果优于sol-gel包埋法制备的固定化酶,在优化条件下,以大孔树脂吸附法制备的固定化酶可使生物柴油的单批转化率达到88%。
关键词： 粘质沙雷氏菌 脂肪酶 基因工程菌 sol-gel包埋法 生物柴油 固定化酶
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产脂肪酶粘质沙雷氏菌发酵产酶条件的优化
《生物技术 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：目的:通过对产脂肪酶粘质沙雷氏菌发酵条件的优化,使其酶活力得到大幅度提高。方法:用响应面法对产脂肪酶粘质沙雷氏菌的发酵产酶培养条件进行了优化。首先通过逐因子实验考察了该菌株产酶所需的最适碳源和氮源,在此基础上通过Plackett-burman法设计实验,考察了几种因素对产酶影响的大小,然后用最陡爬坡实验逼近以上几种因子的最大响应区域后,采用Box-Behnken设计25组实验,并利用Design-Expert对实验结果进行二次回归分析。结果:对产酶具有显著效应的4个因素为:蛋白胨、CaCl2、吐温、大豆油。实验优化到最佳的产酶条件为:糊精1%,蛋白胨0.7%、CaCl20.3%、吐温-80 1.68%、大豆油1.81%、K2HPO40.05%、MgSO40.05%、FeSO40.1%。结论:优化后发酵液上清的脂肪酶活力可达97.52U/ml,比优化前提高了10倍。
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