科研产出
素馨属植物ISSR-PCR反应体系的建立和优化
《江苏农业科学 》 2020 北大核心
摘要：为了确定素馨属植物ISSR-PCR反应的最佳体系,以素馨属植物叶片为材料,采用单因素试验和正交试验设计2种方法对影响素馨属ISSR-PCR反应中的dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA以及Mg2+5个因素进行4个水平的优化试验,通过试验建立了素馨属25μL最佳反应体系:dNTPs浓度为0.10 mmol/L、Taq DNA聚合酶用量2.5 U、引物浓度为0.7μmol/L、模板DNA用量为2.5 ng、Mg2+浓度为1.0 mmol/L.在最佳反应体系下,从100条ISSR引物中筛选出了8条ISSR引物,并确定了各引物的最佳退火温度.利用29份素馨属材料进行最佳反应体系的验证,结果表明,该优化体系扩增条带清晰,稳定性高,重复性好,表明该反应体系适用于素馨属植物ISSR分子标记的研究.本研究可为素馨属植物遗传多样性以及亲缘关系等方面的研究提供参考依据.
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拳卷地钱基因组DNA提取及ISSR-PCR扩增体系优化
《时珍国医国药 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：目的建立一种拳卷地钱基因组DNA的提取方法;对影响拳卷地钱ISSR-PCR反应的各因素进行优化,建立稳定的反应体系。方法采用改进的CTAB法提取拳卷地钱基因组DNA;以Taq酶、Mg2+、dNTP和引物4因素3水平的正交设计对拳卷地钱ISSR-PCR反应体系进行优化。结果采用改进的CTAB法提取的拳卷地钱基因组DNA质量高,且适用于ISSR-PCR扩增;获得拳卷地钱最佳反应体系(20μl)为:Taq酶0.5 U,Mg2+2.0 mmol/L,dNTP 250μmol/L,模板DNA 50ng,引物0.6μmol/L。结论建立并优化了拳卷地钱总DNA提取方法及ISSR-PCR反应体系。
关键词： 拳卷地钱 DNA提取 ISSR-PCR 正交设计 体系优化
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龙荔基因组DNA的提取及ISSR-PCR体系的建立与优化
《西南农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：应用改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA,探讨龙荔ISSR-PCR扩增反应体系的建立和优化。结果表明,经过改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA效果良好,所提取的DNA纯度较高,符合ISSR-PCR反应的要求;龙荔ISSR-PCR最佳反应体系(反应总体积20μl):1×Buffer缓冲液(含适量Mg2+),1 UTaqDNA聚合酶,0.20 mmol/L dNTP,0.25μmol/L引物,DNA模板70~80 ng/μl,退火温度53~54℃。
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利用正交设计法对叉叶苏铁ISSR-PCR反应体系的优化研究
《植物研究 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：比较CTAB法和SDS法提取叉叶苏铁(Cycas micholitzii)的总DNA,发现CTAB法是提取叉叶苏铁总DNA的较好方法;对叉叶苏铁ISSR-PCR反应体系中的4个主要因素dNTPs,TaqDNA聚合酶,引物及Mg2+进行最优条件筛选;采用单因素法探讨DNA模板量、退火温度和循环次数的最佳反应条件,建立了适合于叉叶苏铁的最佳ISSR-PCR反应体系(20μL体系):1×Buffer,75ng DNA模板,dNTPs 250μmol·L-1,Taq酶1.0U,引物0.2μmol·L-1,Mg2+2.5mmo·lL-1,反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,52℃退火1min,72℃延伸2min,循环40次,72℃延伸10min,4℃保存。本研究结果为苏铁纲植物的分子生物学和分子系统学研究提供理论参考。
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