科研产出
农杆菌介导甘蔗愈伤组织遗传转化体系的优化
《中国生物工程杂志 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：以甘蔗胚性愈伤组织为材料,对愈伤组织增殖、分化、幼苗生根的最适抗生素(Km)浓度进行筛选,并对影响农杆菌介导的甘蔗遗传转化因素:预培养时间、侵染时间和共培养时间等进行了研究。最后确立了甘蔗愈伤组织增殖、分化及幼苗生根三个阶段的最适抗生素(Km)浓度分别为300 mg/L,40 mg/L,20 mg/L。确定了农杆菌浸染的预培养时间、侵染时间和共培养时间分别为4d,30min,4d。PCR检测表明,61.6%的抗性植株可扩增出预期的片段,表明外源基因已经整合到甘蔗基因组中。为进一步的甘蔗基因功能验证及转基因研究提供良好的技术支撑。
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高山离子芥冷诱导基因转化甘蔗二元植物表达载体构建
《南方农业学报 》 2012 CSCD
摘要：【目的】利用载体重组技术分别将高山离子芥冷诱导基因(Cbcor15a)和报告基因eGFP插入载体pCambia1300-bar,并引入玉米泛素基因启动子UBi-1代替载体本身启动子CaMV35s,重组为适合甘蔗转基因的二元植物表达载体pCambia1300-cbcor15a-bar。【方法】参照pCambia1300-bar载体多克隆位点和基因Cbcor15a、eGFP和启动子UBi-1的核苷酸序列设计引物,通过载体重组技术将基因和启动子分别插入相应的位点。利用基因枪分别将pCambia1300-bar载体和重组载体导入洋葱表皮细胞,用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察。【结果】与导入pCambia1300-bar载体的洋葱表皮细胞相比较,导入重组载体pCambia1300-cbcor15a-bar的洋葱表皮细胞内有强烈的绿色荧光信号。【结论】重组甘蔗转基因二元植物表达载体启动子Ubi-1能够调控下游冷诱导基因Cbcor15a和报告基因eGFP的正常高效表达,为外源基因Cbcor15a转化甘蔗提供保障。
关键词： Cbcor15a 甘蔗 转基因 植物表达载体构建 瞬时表达
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甘蔗eEF1A反义表达载体构建及其遗传转化研究
《西南农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：延伸因子eEF1A(Eukaryotic elongation factor 1A)是在核糖体催化氨基酸链延伸以及推动、控制蛋白质合成过程中起重要作用的蛋白质因子。利用RT-PCR技术扩增得到甘蔗eEF1A的编码区1420 bp的cDNA序列,反向连接到受体质粒pB I121载体中,构建含GUS基因的甘蔗eEF1A基因反义植物表达载体pB IantiEF。用冻融法将pB IantiEF导入根癌农杆菌菌株EHA105中,通过农杆菌介导法,将eEF1A反义基因转化烟草K346。将获得的43株抗卡那霉素烟草经PCR筛选,得到38株呈阳性的反义转基因植株,阳性植株再经Dot-Southern杂交检测,证明eEF1A基因已整合进其中的34株烟草基因组中,平均转化率为79%。反义转基因烟草植株移栽后表型出现不同程度的变异,叶片变厚,卷曲不能平展,叶背出现明显皱折,并外突成芽,茎、叶的伸长明显受阻,顶芽出现双芽,开花延迟。推测甘蔗延伸因子eEF1A可能与甘蔗茎、叶伸长生长和发育有关。
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甘蔗根癌农杆菌介导遗传转化研究
《农业生物技术学报 》 2002 CSCD
摘要：以根癌农杆菌(Agrobactriumtumefaciens )EHA105菌株介导将海藻糖合酶基因(TSase)遗传转化甘蔗(Saccharumofficinarum)胚性愈伤组织,对转化材料进行连续的PPT抗性筛选,获得93株抗性植株。对部分植株的总DNA作PCR及Dot-Southern检测,结果3株呈阳性,而对照均为阴性,证明外源基因已整合到甘蔗基因组中。
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