甘蔗叶绿体DNA的提取方法及其验证分析

黄玉新; 罗霆; 周珊; 高轶静; 段维兴; 杨翠芳; 周会; 张革民; 《南方农业学报 》 2014 CSCD

摘要：【目的】探索适于普通实验室条件的甘蔗叶绿体DNA(cpDNA)提取方法,为甘蔗叶绿体分子生物学研究提供参考。【方法】参考水稻、小麦等作物cpDNA的DNase I差速离心处理法,采用改良的DNase I差速离心法提纯甘蔗cpDNA,并对其trnL基因序列进行比对分析,证实所提取cpDNA的可行性。【结果】采用改良的DNase I差速离心处理法提取能得到量多、杂质少的cpDNA,用Eppendorf蛋白核酸测定仪检测,平均每克甘蔗样可提取2.71μg cpDNA,OD260/OD280为1.79~1.90。对提取的cpDNA的trnL基因序列进行比对分析,证实参试的甘蔗栽培种、斑割复合体后代及其回交材料的叶绿体trnL基因与已报道的甘蔗栽培种NCo 310、SP-80-3280和割手密HN0046的trnL基因相似度均在99.0%以上,并在381、386、389、392、393、400、488、490 bp等8个位点上检测出碱基突变、插入和缺失现象。【结论】采用改良的DNase I差速离心处理法提取甘蔗叶绿体DNA具有可行性,提取的甘蔗cpDNA完全可以用于后续的分子水平研究。

关键词： 甘蔗 叶绿体DNA 提取 trnL基因 改良的DNase I差速离心法