一种改良的杧果叶片总RNA提取方法

黄章保; 任惠; 董龙; 蔡昭艳; 方位宽; 王小媚; 苏伟强; 刘业强; 邱文武; 《分子植物育种 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：杧果叶片组织复杂的代谢成分导致RNA提取难度较高.为了提高总RNA提取质量,本研究在已有文献报道方法的基础上,改进并获得了一种利用丙酮洗涤液氮研磨材料和使用0.3 mol/L氯化锂(LiCl)溶液、2倍体积无水乙醇作为第二次沉淀剂的RNA提取方法.实验结果表明,改进方法显著减少了RNA提取过程中的杂质沉淀量,提取的总RNA电泳条带完整,OD260/280为1.9左右,平均得率达到329.8 g/g FW±11.2 μg/g FW.RNA反转录和双链cDNA相关序列多态性扩增(SRAP-PCR)的进一步验证实验获得了清晰的多态性条带,表明提取的杧果叶片总RNA具备较高质量,适用于开展分子生物学实验.

关键词： 杧果;RNA提取方法;多糖;多酚

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一年两收栽培夏黑葡萄香气成分分析

陈彦蓓; 罗惠格; 陆媚; 农慧兰; 白扬; 林玲; 白先进; 曹雄军; 陈爱军; 王博; 《南方农业学报 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：【目的】分析一年两收栽培夏黑葡萄夏果和冬果的香气成分,为提高该品种的芳香品质及促进其一年两收栽培技术的发展提供理论依据。【方法】以8年生一年两收栽培的夏黑葡萄为试验材料,于始转色期、成熟期和成熟后期采集夏果和冬果。采用HS-SPME-GC-MS方法,分别对夏果和冬果3个时期的香气成分进行定性定量分析,并监控不同发育期持续天数、气象指标和浆果理化指标的变化。【结果】一年两收栽培夏黑葡萄从萌芽到成熟过程中,夏果的每日气温逐渐上升,而冬果的每日气温逐渐降低,冬果较夏果转色期更早,成熟期持续的时间更长。成熟期冬果可溶性固形物和可滴定酸含量均高于夏果;夏果和冬果于始转色期、成熟期和成熟后期分别检测到48、51、47种和52、56、56种香气成分,包括醛类、醇类、酯类、酮类、萜烯类和酸类。冬果3个时期的香气成分总含量分别为472.83、1020.27和836.43μg/L,均显著高于夏果的459.39、638.57和659.20μg/L（P<0.05,下同）。成熟期夏黑葡萄中香气成分含量最高的是醛类化合物,其次是醇类化合物,夏果和冬果中醛类化合物含量分别为446.34和600.18μg/L,醇类化合物含量分别为120.21和163.44μg/L。成熟期夏黑葡萄中单体类香气成分以C6化合物为主,其中含量最高的是青草及苹果香味的己醛,其后依次是草本香和果香型的2-己烯醛、（Z）-3-己烯醛和己醇,冬果中上述单体类化合物的含量均显著高于夏果。成熟期夏果和冬果中最具代表性的8个差异香气化合物为2-己烯醛、乙酸乙酯、香茅醇、苯乙醇、橙花醇、（Z）-3-己烯醛、香叶醇和辛酸乙酯,冬果中上述差异化合物的含量均显著高于夏果。通过对气候条件的分析,与夏果相比,夏黑葡萄冬果生长季后期冷凉的环境和更为干燥的气候是其香气成分含量显著高于夏果的主要原因。【结论】一年两收栽培模式下两季葡萄果实香气成分组成和含量的差异是气象因子综合作用的结果,冬果生长季的气候条件更有利于葡萄芳香品质的提高。

关键词： 夏黑葡萄 一年两收栽培 香气成分 气候

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广西地区西番莲产量和品质形成特征及其对气象因子的响应

田青兰; 吴艳艳; 刘洁云; 黄伟华; 牟海飞; 张英俊; 韦绍龙; 韦弟; 《生态学杂志 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：为探明广西地区西番莲的产量和品质形成特征及对气象因子的响应,以国内主栽西番莲品种‘台农1号’为试验材料,调查测定其产量和产量构成以及同期成熟的各级枝蔓果实品质和同级枝蔓在不同时段成熟的果实品质,采用相关分析和回归分析统计方法研究果实品质性状与开花到成熟期气象因子的关系。结果表明:‘台农1号’西番莲的单位面积产量为11.65 t·hm^-2,二级蔓和一级蔓占单株产量的比例分别为58.2%和24.2%,是产量构成的主要枝蔓;果实的收获时段为移栽后91～186 d,果实成熟时间范围较大,为43～165 d,但果实形态和单果重受成熟时间的影响不大;同时期收获的各级枝蔓间品质差异主要在果浆重、可滴定酸含量和果皮厚度;同级枝蔓不同生长季收获的果实品质中,果浆重、出汁率随生长季延后和成熟时间的增加而增加,但当成熟时间大于125.6和141.6 d后,果浆重和出汁率分别开始下降;而可溶性固形物含量和果皮厚度则从次年1月开始呈下降趋势;除最大相对湿度外,果实发育到成熟期的温度和光照强度均与果浆重和出汁率呈极显著负相关,而相对湿度与其呈极显著正相关。当果实开花到成熟期的日平均温度为16.1～18.7℃、日平均光照强度为2.8×10³～3.2×10³lx、日平均相对湿度为88.0%～89.4%时,‘台农1号’的果浆重（>35 g）和出汁率（>45%）均较易获得高值。

关键词： 西番莲 产量 品质 气象因子 枝蔓

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澳洲坚果MiSTPP6基因克隆及低温胁迫下表达分析

蔡元保; 杨祥燕; 李季东; 黄思婕; 李穆; 巫辅民; 《南方农业学报 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：[目的]克隆澳洲坚果丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP1)家族基因(MiSTPP6),并分析其不同组织及低温胁迫下的表达模式,为澳洲坚果PP1家族基因的抗寒分子机制提供理论依据.[方法]基于澳洲坚果转录组测序结果,利用RT-PCR技术克隆MiSTPP6基因,对其序列进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR检测其在不同组织及低温胁迫下的表达情况.[结果]从澳洲坚果中克隆获得MiSTPP6基因(GenBank登录号为MT374553),其cDNA全长2129 bp,最大的阅读框(ORF)长度为948 bp,编码315个氨基酸残基,含有PP1蛋白家族的典型结构域(MPP_PP1_PPKL)和特征性序列(LRGNHE).MiSTPP6蛋白为稳定的亲水性蛋白,以丝氨酸磷酸化为主,可能定位于细胞质,属于非分泌型蛋白或膜蛋白,与已知植物PP1蛋白的氨基酸序列具有很高的相似性.MiSTPP6蛋白的二级结构由α-螺旋(占40.00%)、无规则卷曲(占32.38%)、延伸链(占18.41%)和β-转角(占9.21%),其三级结构与模板蛋白4v0u.1.A的结构相似度为80.60%,GMQE值为0.89.MiSTPP6基因在根、茎、叶、刚开放的小花和谢花后30~45 d的小果中均有表达,其中,MiSTPP6基因在刚开放的小花中的相对表达量最高.4℃低温胁迫后0.5~24.0 h,MiSTPP6基因在澳洲坚果苗期叶片中的相对表达量较对照明显下调,整体上呈持续下降的趋势.[结论]MiSTPP6属于PP1家族基因,具有组织表达特异性,可能在澳洲坚果抗寒分子机制中发挥重要的调控作用.

关键词： 澳洲坚果;蛋白磷酸酶;PP1;基因克隆;表达分析;低温胁迫

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产角鲨烯细胞工厂的构建及关键基因的筛选、克隆与表达

李宁; 刘波; 刁梦雪; 陆坚; 刘伟丰; 陶勇; 《生物工程学报 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：角鲨烯因具有很强的抗氧化、抗菌和抗肿瘤活性,被普遍应用于医药、保健品和化妆品等领域.文中在实验室构建的高效合成萜类化合物底盘菌株工作的基础上,以角鲨烯为目标产物,通过过表达法尼基焦磷酸合酶基因ispA得到高效合成三萜化合物的底盘菌株;然后对原核生物来源的角鲨烯合酶进行系统发育分析、筛选、克隆和表达,得到两株高效合成角鲨烯的大肠杆菌Escherichia coli工程菌株.其中,导入来源于嗜热蓝细菌Thermosynechococcus elongatus和深蓝聚球蓝细菌Synechococcus lividus的角鲨烯合酶的工程菌株,角鲨烯产量分别达到(16.5±1.4)mg/g(细胞干重含量,后同)和(12.0±l.9) mg/g,发酵液浓度达到(167.1士14.3) mg/L和(121.8±19.5)mg/L.相比于当前普遍使用的人源角鲨烯合酶及初代菌株,来源于T.elongatus和S.lividus的角鲨烯合酶分别使角鲨烯产量大幅提升了3.3倍和2.4倍,为原核细胞异源合成角鲨烯打下坚实的基础.

关键词： 大肠杆菌;角鲨烯;生物合成;原核基因筛选

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广西花生产业现状分析及其发展建议

蒋菁; 贺梁琼; 韩柱强; 严华兵; 覃夏燕; 甘秀芹; 刘菁; 唐荣华; 钟瑞春; 《南方农业学报 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：【目的】调研剖析广西花生产业现状及存在的主要问题,为优化广西花生产业布局、提升花生产品竞争力及推动产业可持续发展提供参考依据。【方法】2017—2019年通过对广西14个地级市的花生种植面积、区域分布、栽培品种、产量、种植收益,以及花生加工企业原料来源、产品品牌建设、加工规模及销售等情况进行调研,综合分析广西花生产业现状,找出产业发展中存在的主要问题,并针对性地提出对策建议。【结果】广西属于我国南方春秋两熟、油食兼用的花生产区,各地市均有种植,普遍采用轮作或套种等种植方式。根据广西花生种植集中区域的地理位置,主要分为五大产区:桂南花生产区（南宁市和崇左市）,桂中花生产区（来宾市和贵港市）,桂北花生产区（桂林市）,桂东花生产区（贺州市和梧州市）,南部沿海花生产区（北海市、钦州市和防城港市）。2019年广西花生种植面积21.85万ha,总产量67.20万t,65%用于榨油、25%用于食用、10%作种用。广西花生生育期短,适应性广,种植效益高,但种植机械化水平较低,属劳动密集型产业,以农户自给自足生产为主,无机械干燥设备,花生品质受天气影响较大,且不同年份或种植户间的花生品质差异明显;广西花生加工产品主要是花生油和烤果类,由于本地生产的花生收购价格高,加工企业生产原料主要来源于其他省份或从国外进口,无法有效带动广西花生种植业的快速发展。【建议】加大政策扶持力度,优化产业布局;发挥区域优势,形成区域特色;加强基础研究,促进产学研联合攻关;加速新技术、新品种推广;提高花生生产机械化水平,降低生产成本;建立农民专业合作社,以龙头企业带动产业发展,从而实现广西花生产业的健康持续发展。

关键词： 花生 产业 发展现状 存在问题 对策建议 广西

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侵染广西甜椒的西瓜银斑驳病毒分子鉴定

谢慧婷; 崔丽贤; 秦碧霞; 陈锦清; 李战彪; 蔡健和; 《植物病理学报 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：西瓜银斑驳病毒（Watermelon silver mottle virus,WSMoV）为布尼亚病毒科（Bunyaviridae）番茄斑萎病毒属（Orthotospovirus）病毒,通过蓟马以持久增殖型方式传播,主要危害番茄、辣椒、西瓜等茄科和葫芦科作物,引起褪绿轮纹、环斑、皱缩等症状,造成严重的经济损失[1]。WSMoV具有Tospovirus病毒属病毒典型的基因组特征,病毒粒子球状,具包膜,基因组为三分体单链RNA,根据分子量大小分别命名为L RNA、M RNA和S RNA,

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杂草对光系统Ⅱ抑制剂的抗药性研究进展

龙迪; 王彦辉; 曾东强; 《分子植物育种 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：随着除草剂使用量和使用频率的不断增加,杂草抗药性问题也逐渐成为杂草防除及治理的难点和热点。目前杂草对PS （Photosystem）Ⅱ抑制剂类除草剂产生抗药性主要分为靶标抗性和非靶标抗性。本研究综述了近年来杂草对PSⅡ抑制剂类除草剂抗药性的产生、发展现状及杂草抗PSⅡ抑制剂类除草剂的机理。针对这些问题,提出除草剂使用过程中需要注意的事项,为延缓杂草对该类除草剂产生抗药性提供一定参考。

关键词： 杂草抗药性 光系统Ⅱ抑制剂 抗药性机理 除草剂

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广聚萤叶甲取食对豚草挥发物组分的影响

崔少伟; 马超; 张燕; 白强; 陈红松; 臧连生; 周忠实; 《环境昆虫学报 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：植物在遭受植食性昆虫为害后,会系统性地释放虫害诱导挥发物（HIPVs）。为探明广聚萤叶甲取食对豚草挥发物组分的影响,本研究采用动态顶空吸附法和气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）,收集并分析了豚草在受机械损伤和受广聚萤叶甲取食损伤前后挥发物组分及相对含量的变化。结果表明,豚草健康植株与损伤植株的挥发物组分和相对含量具有明显的差异。与健康植株相比,受机械损伤后的豚草挥发物中新出现了乙酸芳樟酯、桉树醇、十二醛、γ-木罗烯、植物醇、β-波旁烯,这些化合物在受损后立即释放,表明它们是组成型豚草挥发性有机化合物（VOCs）;受取食损伤后,挥发物中大根香叶烯D的相对含量显著增加,表明大根香叶烯D为诱发型VOCs;而较于健康植株和机械损伤植株,取食损伤后的豚草VOCs中增加了桧烯、辛醛、β-罗勒烯、香茅醇,表明这些化合物为HIPVs。此外,机械损伤与取食损伤对豚草VOCs组分的影响有所不同。受机械损伤后,挥发物的种类减少后（损伤后第3天）很快又恢复到健康水平,而受取食损伤后,VOCs的种类逐渐减少（损伤后3 d内）。受损后不同时期挥发物的种类和相对含量亦有显著差异。受损后的早期（1 d）,释放的多为一些豚草绿叶性物质,而在后期有一些诱导物释放。本研究结果为利用豚草VOCs和HIPVs组分提高广聚萤叶甲对豚草的防控效果奠定了重要基础。

关键词： 豚草 广聚萤叶甲 机械损伤 挥发物 物质鉴定

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香蕉果实MaNPC1基因原核表达及多克隆抗体制备

帅良; 殷菲胧; 廖玲燕; 刘云芬; 段振华; 李丽; 何雪梅; 李昌宝; 孙健; 《南方农业学报 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：【目的】对香蕉果实非特异性磷脂酶C基因（MaNPC1）开放阅读框（ORF）进行原核表达,并制备其多克隆抗体,为深入探究MaNPC1在香蕉果实抵御炭疽病中的作用机制提供理论依据。【方法】克隆MaNPC1基因ORF序列,对其进行生物信息学分析及抗原性预测,并通过双酶切法构建其原核表达载体,利用热激法转入大肠杆菌Rosetta 2（DE3）感受态细胞中进行诱导表达,重组蛋白经Ni-NTA树脂层析柱纯化后免疫新西兰兔,以制备多克隆抗体。同时,运用Western blotting和实时荧光定量PCR分别检测香蕉果实贮藏过程中在炭疽病侵染胁迫下MaNPC1蛋白表达水平及MaNPC1基因相对表达量。【结果】重组质粒pGEX-6p-3-MaNPC1经双酶切后得到1650 bp的特异性条带,说明原核表达载体构建成功,将其转入大肠杆菌Rosetta 2（DE3）感受态细胞后成功表达。MaNPC1蛋白分子式为C₂₇₄₇ H₄₂₄₉ N₇₆₉ O₇₉₃ S₁₀ ,分子量为61.06 k D,理论等电点（pI）为8.96;丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和丝氨酸含量较高,分别占氨基酸总数的8.7%、8.2%、7.8%和7.7%;不稳定指数为47.14,表明其为不稳定蛋白;蛋白抗原区段丰富且亲水性氨基酸数目明显高于疏水性氨基酸,有利于后续抗体的制备。制备的多克隆抗体效价较高,为1∶2048000。Western blotting检测发现,香蕉果实贮藏过程中MaNPC1蛋白表达水平呈上升—下降—上升的变化趋势;炭疽病侵染组MaNPC1蛋白除贮藏15 d时的表达水平比对照组低外,其他贮藏时间均略高于对照组。实时荧光定量PCR检测结果表明,MaNPC1基因相对表达量在香蕉果实贮藏过程中呈逐渐上升趋势;贮藏3¹5 d,炭疽病侵染组MaNPC1基因相对表达量均显著高于对照组（P<0.05）。【结论】炭疽病侵染能提高MaNPC1蛋白表达水平,故推测MaNPC1蛋白参与香蕉果实抵抗炭疽病侵染。

关键词： 香蕉 MaNPC1基因 原核表达 多克隆抗体 炭疽病 贮藏

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