科研产出
中温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的高效表达及其发酵条件优化
《食品与发酵工业 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：以枯草芽孢杆菌为表达系统,以中温α-淀粉酶为目标蛋白,研究了启动子和信号肽对外源蛋白表达分泌的影响。分别选取了4种启动子以及8种信号肽来进行筛选,结果表明,启动子PApr E的强度最高,信号肽SPnpr E的分泌效率最好。针对重组菌株1A751Q31进行系统的发酵优化,在72 h发酵液中α-淀粉酶酶活达到380U/m L。在7.5 L发酵罐中进行放大实验,发酵液中α-淀粉酶酶活最高达到853 U/m L。以上研究表明,α-淀粉酶适合在枯草芽孢杆菌中进行表达,同时表明枯草芽孢杆菌是良好的异源蛋白表达系统。
关键词： 枯草芽孢杆菌 α-淀粉酶 启动子 信号肽 发酵优化
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重组枯草芽孢杆菌发酵廉价原料生产普鲁兰酶
《生物技术 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：[目的]构建长野芽孢杆菌普鲁兰酶突变体枯草芽孢杆菌工程菌株,优化发酵条件,筛选廉价的培养基原料生产普鲁兰酶。[方法]利用分子生物学手段,将基因pul324和表达载体p WB980连接,构建表达质粒p WB-pul324并转化Bacillus subtilis WB600;对表达产物进行SDS-PAGE分析和初始酶活的测定。进一步优化发酵条件,对不同碳源和氮源进行发酵培养基的筛选,同时研究不同金属离子的添加和培养基初始p H、接种量对发酵产酶的影响。[结果]获得基因工程菌B.subtilis WB600/p WB-pul324,SDS-PAGE电泳结果显示在89 k Da处有特异性条带,发酵初始酶活为12.34 U/ml;筛选得到玉米淀粉水解液和玉米浆干粉为培养基最适碳源和氮源,其最适浓度分别为50 g/L和30 g/L。Mn~(2+)、Fe~(3+)、Fe~(2+)和Tween-80的添加能提高发酵产酶活力。在最适初始p H 6.5,以最适5%接种量接种于优化后的培养基中,摇瓶发酵80 h普鲁兰酶的酶活达到414.48 U/ml。[结论]实现了普鲁兰酶突变体在枯草芽孢杆菌中的高效表达,筛选获得的培养基主要原料经济低廉,经过发酵条件优化后,重组菌酶活达到414.48 U/ml,是之前研究结果(20.16U/ml)的20倍。
关键词： 普鲁兰酶 长野芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌 玉米淀粉水解液 玉米浆干粉 发酵条件优化
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枯草芽孢杆菌9A与4种药剂混配对杧果炭疽病防控研究
《南方园艺 》 2015
摘要：【目的】研究枯草芽孢杆菌9A专利菌株与4种化学药剂混配协同控制杧果炭疽病作用,为田间防治杧果炭疽病提供适合的混配剂量,以减少化学农药使用量。【方法】将稀释2 000倍咪鲜胺、嘧菌酯、吡唑醚菌酯及稀释1 000倍多菌灵与5%和10%9A混合,分别在室内平板、离体叶片、果实上测定其抑菌活性,并进行田间防控试验。【结果】枯草芽孢杆菌9A在与4种化学药剂混合后,其菌体生长虽受到一定的抑制,但混合液的抑菌活性显著提高。离体叶片和离体果实试验结果表明,10%验9A与稀释2 000倍咪鲜胺、嘧菌酯、吡唑醚菌酯及稀释1 000倍多菌灵混合后,处理叶片的防效分别为66.67%、75%、83.34%和53.34%,处理果实的防效分别可达80%、75%、75%和60%,均显著高于单一化学药剂处理及菌液处理。田间试验结果表明,稀释2 000倍嘧菌酯、咪鲜胺、吡唑醚菌酯和稀释1 000倍多菌灵4种药剂和10%9A混合液处理的防治效果分别为70.36%、64.37%、77.67%和62.06%,与单一药剂相比分别提高27.20%、14.69%、27.10%和20.10%。【结论】枯草芽孢杆菌9A与化学药剂混配可有效防治杧果炭疽病,其防效均显著高于单一化学农药处理及单一菌液处理,可以减少化学农药的使用量。
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枯草芽孢杆菌9A对杧果炭疽菌的抑菌作用及防病效果
《果树学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：【目的】枯草芽孢杆菌9A分离自瓜类白粉病病叶病斑处,为探讨其防病利用价值,【方法】测试了其培养滤液对杧果炭疽菌菌丝生长、菌丝膜透性、产孢量、孢子萌发、附着胞形成的影响,以及其培养液在室内和果园里对杧果叶片炭疽病的防病效果。【结果】含9A培养滤液浓度10%时菌丝生长抑制率为91.86%,孢子的产生受到促进作用;当浓度达1.5%时,附着胞不能黑化,达4%时,孢子不能萌发;9A培养滤液可以提高杧果炭疽菌菌丝的膜透性,培养至36 h左右时膜透性最大;接种后24 h时以9A培养液处理,室内离体叶片上的防效为0,果园嫩梢上的防效是40.55%;处理9A培养液后24 h时接种,室内离体叶片上的防效是100%,果园嫩梢上的防效是82.04%。【结论】枯草芽孢杆菌9A在杧果炭疽病的防治中具有潜在的利用价值。
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一株产酸性α-淀粉酶菌株的筛选、纯化及酶学性质
《应用与环境生物学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：从南宁酒厂附近土壤中筛选到一株产淀粉酶的野生菌株GXBA-4,经革兰氏染色、芽孢染色以及16SrDNA鉴定,初步确定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacien).将该菌株发酵液经过硫酸铵沉淀和凝胶过滤纯化出一种α-淀粉酶,该酶相对分子质量约为57×103;反应最适温度为40~45℃,适应温度范围广,30℃时仍具有80%以上的相对活力;最适pH为5.0,为低温酸性淀粉酶.该酶水解可溶性淀粉的产物,经HPLC检测主要是以葡萄糖,麦芽糖以及麦芽三糖为主的低聚糖,分别以α-环糊精、β-环糊精、可溶性淀粉、玉米生淀粉为底物,还原糖产物比为0:0:99:3.4,表明该酶为典型的α-淀粉酶.
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枯草芽孢杆菌B47菌株高产抗菌物质的培养基及发酵条件优化
《微生物学通报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis B47菌株为番茄内生细菌,也是玉米小斑病拮抗菌,能产生对玉米小斑病菌有强烈抑制作用的抗菌物质。以B47菌株发酵液的无菌滤液对玉米小斑病菌的抗菌活性为检测指标,测定B47菌株产抗菌物质培养所需的最佳碳、氮源和无机盐,并通过正交试验法对该菌株产抗菌物质的培养基配方和摇瓶发酵条件进行优化。研究结果表明,B47菌株产抗菌物质最佳碳、氮源和无机盐分别为蔗糖、酵母浸膏和MgSO4 7H2O,最优培养基是YSB(Yeastextract-sucrose-beef extract)培养基,其配方为:蔗糖2%,酵母浸膏2%,牛肉浸膏1.5%,MgSO4 7H2O0.06%,FeSO4 7H2O 0.000 9%,最优发酵条件组合为:30°C,pH 7.0,170 r/min摇床培养6 d,接种量为1%,装液量为40 mL/200 mL。
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生防细菌1505的鉴定及其对采后柑橘炭疽病的抑制效果
《西南农业学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：采用细菌学方法及分子生物学技术对菌株1505进行鉴定,并对其在防治采后柑橘炭疽病上的效果进行研究。结果显示,菌株1505对柑橘炭疽病菌具有拮抗活性,其活菌悬浮液在PDA平板上对柑橘炭疽病菌产生明显抑制作用,而灭菌发酵液和去除菌体的发酵液均无抑菌效果;连续8次在人工培养基上转代培养,菌株1505对柑橘炭疽病菌生长的抑制力没有发生明显改变;菌株1505对胶孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides(Penz.)Sacc.]引起的柑橘炭疽病有明显的防治作用,刺伤接种的防效为48.8%,自然发病的防效为46.3%。根据形态学特征和生理生化反应,结合16S rDNA序列分析结果,将菌株1505鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
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枯草芽孢杆菌B47菌株抗菌物质的分离纯化及其对玉米小斑病的防治作用
《中国生物防治学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis菌株B47为番茄内生细菌,能产生对多种植物病原菌有抑制作用的抗菌物质。通过盐酸沉淀、甲醇抽提、硅胶柱层析、凝胶过滤层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)法提取和纯化到该抗菌物质。理化性质测定结果表明,该物质热稳定性和抗紫外线稳定性好;在碱条件下稳定;对蛋白酶不敏感;能溶于甲醇;双缩脲反应呈阳性,茚三酮反应呈阴性,但经酸水解后茚三酮反应呈阳性,推测该物质可能为环肽类物质。该物质对测试的14种病原真菌有拮抗作用,其中,对玉米大小斑病菌和各种香蕉叶斑病菌的拮抗作用强,但对供试病原细菌无拮抗作用。该抗菌物质在0.3g.L-1浓度下对玉米小斑病的田间防治效果为53.05%。
关键词： 枯草芽孢杆菌 抗菌物质 分离纯化 抗菌谱 防治效果
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