科研产出
宏基因组中不依赖辅酶B_(12)甘油脱水酶基因的筛选和表达
《基因组学与应用生物学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：通过特定的引物,以土壤宏基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增获得3.3 kb的DNA片段,该片段连接于pSE380载体构建重组质粒pSE380-dhaB12用于测序和表达。序列分析表明,该DNA片段编码的氨基酸序列与已报导的丁酸梭菌不依赖辅酶B12甘油脱水酶的相似性达99%。通过IPTG诱导,dhaB12基因在大肠杆菌中表达成功,SDS-PAGE分析表明有88 kD和34 kD两条蛋白质条带,在没有辅酶B12存在的情况下,所表达的酶具有明显的甘油脱水酶活性。
关键词： 宏基因组 不依赖辅酶B12 甘油脱水酶 筛选 表达
全文链接
请求原文
酿酒酵母中亚硫酸盐转运基因SSU1的分子进化分析
《遗传 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：SSU1基因是涉及亚硫酸外排及SO2耐受性的重要因素之一。为了研究酿酒酵母(Saccharomyce cerevisiae)中SSU1对SO2耐受性及其分化机制,文章探讨了SSU1基因在酿酒酵母中的遗传特征及进化规律。基于SSU1基因序列的聚类分析表明,酿酒酵母群体可通过该基因分为3个亚群,且与其分离的地理位置无关;基于群体数据的McDonald-Kreitman检验表明,SSU1基因在酿酒酵母中受到适应性选择的作用;Ka/Ks检验表明,在酿酒酵母中,不同的亚群间有Ka/Ks显著大于1的值,且PAML的支系模型检验到正选择作用在群体中特定的支系上;PAML的支系-位点模型检验获得9个潜在正选择作用位点,其中有4个发生在受正选择作用的特定支系中;基于ssu1p蛋白结构的分析表明,在特定支系存在的正选择作用位点中,除345(R/K)位点上两氨基酸替换均为碱性氨基酸外,其他3个位点均是极性氨基酸/疏水性氨基酸之间替换,考虑不同区域的氨基酸pKa值对其维持正常的功能有着重要的作用,在该类位点的替换可能影响到ssu1p蛋白对SO2的转运作用。
全文链接
请求原文
响应面法优化甘露醇产丁醇的发酵条件
《化工进展 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：以褐藻的主要成分甘露醇为底物,利用丙酮丁醇梭菌ATCC824发酵生产丁醇。采用Plackett-Burma(nP-B)和Box-Behnken优化发酵条件。在Plackett-Burman实验设计时,考察牛肉膏、酵母浸粉、胰蛋白胨、乙酸铵、KH2PO4、MgSO4.7H2O、FeSO4.7H2O、接种量、发酵温度、初始pH值这10个因素对丁醇产量影响,筛选出影响丁醇发酵的重要参数是发酵温度、初始pH值、乙酸铵浓度,利用Box-Behnken设计确定最优发酵条件为发酵温度37.3℃、初始pH值6.38、乙酸铵浓度2.82 g/L。数学模型分析预测最大丁醇产量为8.47 g/L。经实验验证表明,在优化条件下的丁醇产量平均值达到8.52±0.55 g/L。这说明利用统计学方法优化甘露醇的丁醇发酵条件是有效的。
关键词： 甘露醇 丁醇 Plackett-Burman Box-Behnken 丙酮丁醇梭菌
全文链接
请求原文
厌氧梭菌表达载体在大肠杆菌中的直接表达及活性筛选
《应用与环境生物学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：厌氧微生物的代谢途径改造、重组基因表达等分子生物学操作步骤多,易造成氧气接触,从而导致厌氧微生物死亡.针对厌氧梭菌-大肠杆菌穿梭载体的构建和筛选问题,利用纤维素内切酶基因Cphy3367作为报告基因,分析穿梭载体的硫解酶启动子在大肠杆菌中启动基因转录表达的可能性.含有重组质粒pSOS95-Cphy3367的大肠杆菌菌株相对于对照菌株生长迟缓,生物量降低.实时定量PCR检测及重组蛋白酶活检测结果中,发现硫解酶启动子在大肠杆菌中能启动基因转录表达,在37℃温度下48 h后达到高峰.表明硫解酶启动子在大肠杆菌中可以被宿主识别和启动基因表达,基因可以翻译成为蛋白质.在厌氧梭菌的穿梭载体构建中,含有硫解酶启动子的载体可以在大肠杆菌中进行重组载体的活性筛选这个步骤,从而降低梭菌厌氧操作的复杂度和难度.
关键词： 厌氧梭菌 硫解酶启动子 大肠杆菌 重组表达 纤维素酶 菌株筛选
全文链接
请求原文
木薯粉与甘蔗糖蜜混合发酵高浓度酒精
《生物学杂志 》 2013 CSCD
摘要：对木薯粉与甘蔗糖蜜混合原料发酵高浓度酒精的条件进行了优化,先应用P-B(Plackett-Burman)试验筛选影响混合原料高浓度酒精发酵的重要影响因素,结果表明,初始总糖浓度、糖蜜添加时间、初始pH值是影响混合原料酒精发酵的重要因素。采用最陡爬坡实验找到响应面试验的中心点,再利用Box-Behnken设计确定重要参数的最佳水平。各因素的最佳水平是:总糖浓度为29.14%,添加时间为16.5 h,初始pH值为4.7。1 L发酵罐验证试验酒精浓度可达16.07%(V/V)。优化后酒精浓度提高了20%。
关键词： 木薯粉 甘蔗糖蜜 混合发酵 燃料酒精 Plackett-Burman设计
全文链接
请求原文
减氮对华南早晚兼用型水稻源库特性的影响及其机理
《华北农学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：研究了大田条件下氮肥水平(常规施氮肥(187.5 kg/hm2)、减氮28%(135.0 kg/hm2)和不施氮肥(0 kg/hm2)对不同基因型水稻(粤晶丝苗2号、桂香占、华优8305和天优998)的源库特性的影响。结果表明,减氮不会导致华南早晚兼用型水稻产量显著降低在于其能维持或促进水稻的源库协调性。与常规施氮比较,减氮28%有利于提高粤晶丝苗2号、桂香占及华优8305的产量,增幅分别为11.99%,5.51%,6.46%,主要归因于减氮28%能增强后期叶片光合或茎鞘转运而有利于稳定高产形成。减氮28%有利于提高粤晶丝苗2号和桂香占库容和粒叶比,提高华优8305库容有效充实度,而对天优998无显著影响。
全文链接
请求原文
高糖土壤微生物宏基因组文库的构建及β-葡萄糖苷酶基因鉴定
《基因组学与应用生物学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：采用宏基因组技术构建了高糖土壤微生物的DNA文库,该文库约含9万个克隆,文库外源DNA总容量为3.1×10~9bp。利用活性筛选策略,对文库进行筛选,获得11个β-葡萄糖苷酶的阳性克隆,并对其中2个表达β-葡萄糖苷酶的克隆进行亚克隆和序列分析,获得两个编码新型β-葡萄糖苷酶的基因分别命名为:unbgl3A和unbgl3B。生物信息学分析表明:unbgl3A基因由2241个碱基对组成,unbgl3B基因由2292个碱基对组成。在核苷酸水平上,unbgl3A、unbgl3B与已知数据库中的β-葡萄糖苷酶基因没有任何相似性。在氨基酸水平上,与GenBank数据库中已知β-葡萄糖苷酶的相似性分别为73%和69%。
关键词： 高糖土壤 未培养微生物 宏基因组文库 β-葡萄糖苷酶
全文链接
请求原文
机械同步深施肥对水稻品质和养分吸收利用的影响
《华中农业大学学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：以超级杂交稻培杂泰丰和超级常规稻玉香油占为材料,通过大田试验,研究精量穴直播水稻机械深施肥对水稻稻米品质、肥料(N、P、K)吸收利用的影响。结果表明:机械深施缓释肥对稻米品质和水稻N、P、K总积累量的影响因施肥量和品种而异。在0～1 500 kg/hm2范围内,增施机械深施缓释肥一定程度上可以提高精米率、整精米率、直链淀粉含量和蛋白质含量,降低垩白粒率。水稻N、P、K总积累量及每100 kg稻谷需N、P、K量与稻米碾磨品质、直链淀粉含量及蛋白质含量呈正相关,与垩白粒率呈负相关。N、P、K稻谷生产效率和干物质生产效率表现出相反趋势。机械深施缓释肥1 200 kg/hm2(F1)是获得较优的品质和较高的养分吸收与利用率的肥料水平。
关键词： 机械深施肥 水稻 直播 稻米品质 养分吸收利用 缓释肥
全文链接
请求原文
聚乙烯醇固定化胆固醇氧化酶的研究
《南方农业学报 》 2013 CSCD
摘要：【目的】探讨类芽孢杆菌胆固醇氧化酶(COD)的固定化,为COD的应用研究提供参考依据。【方法】以不同浓度的聚乙烯醇、硼酸为主要材料制备固定化酶,并通过试验确定制备固定化酶的最适浓度、最佳反应温度、最适pH、热稳定性、酸稳定性、米氏常数及操作稳定性。【结果】选用12%聚乙烯醇、5%硼酸制备的固定化酶形状好、强度适中、易操作、固定化率高,其最适反应温度60℃,最适反应pH7.0,热、酸稳定性比游离酶好,且稳定范围较游离酶宽,表观米氏常数Km(2.55×10-5mol/L)相对游离酶变小,重复使用5次后酶活力仍能保持在67.8%以上,半衰期为8.91次。【结论】聚乙烯醇制备的固定化COD稳定性好,与底物亲和力较强,可重复回收利用,具有良好的应用前景。
关键词： 聚乙烯醇 胆固醇氧化酶 固定化 酶活性 稳定性 米氏常数
全文链接
请求原文
