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葛根SCoT-PCR反应体系优化及引物筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 严华兵 1 ; 曹升 1 ; 张尚文 1 ; 谢向誉 1 ; 王艳 1 ; 欧昆鹏 2 ;

作者机构： 1.;广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室;广西农业科学院经济作物研究所;广西农业科学院生物技术研究所

2.;广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室;广西农业科学院经济作物研究所;广西农业科学院生物技术研究所;

关键词： 葛根;SCoT-PCR;反应体系优化;引物筛选

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2018 年 01 期

页码： 1-7

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】优化葛根SCoT-PCR反应体系,筛选适用于葛根的SCoT引物,为利用SCoT分子标记进行葛根种质资源鉴定、遗传多样性分析及分子标记辅助育种提供技术支持。【方法】采用正交设计对SCoT-PCR反应体系中的DNA模板量、dNTPs浓度、Mg~(2+)浓度、Taq DNA聚合酶量和引物浓度5个因素进行优化,利用最佳SCoT-PCR反应体系筛选出适用于葛根的SCoT引物,并对该体系进行验证。【结果】最佳葛根SCoT-PCR反应体系20.00μL:DNA模板50.00 ng,dNTPs 0.25 mmol/L,Mg~(2+)1.50 mmol/L,引物0.80μmol/L,Taq DNA聚合酶0.50 U。利用该体系从36条SCoT引物中筛选出35条可从葛根中扩增出清晰条带的引物。使用3条引物对18个葛根材料进行PCR扩增,PCR产物表现出良好的重复性、稳定性和丰富的多态性。【结论】建立的最佳葛根SCoT-PCR反应体系和筛选获得的35条SCoT引物可适用于葛根种质资种鉴定、遗传多样性分析、相关分子标记开发等研究。

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