科研产出
香蕉磷脂酶D的纯化与生化特性分析
《西南农业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】分离纯化香蕉磷脂酶D（PLD）并分析其生化特性,为深入研究香蕉PLD打下基础。【方法】采用硫酸铵沉淀结合柱层析法对香蕉PLD粗酶液进行纯化,考察反应体系中香蕉PLD蛋白含量、Ca2+浓度、pH和反应时间对PLD活性的影响,明确PLD的生化特性。【结果】80%硫酸铵沉淀结合DEAE-sepharose CL-6B阴离子交换柱、Hitrap SP HP阳离子交换柱和Sephadex G-200凝胶层析柱,可将香蕉PLD粗酶液纯化58.74倍,达到电泳纯,香蕉PLD的相对分子量约为43 kD;香蕉PLD活性最佳测定条件为:PLD蛋白含量30.00μg、Ca2+浓度1.20 mmol/L、反应15.00 min、pH 6.5,确定香蕉PLD具有较强亲和力和较高催化活性。【结论】硫酸铵沉淀结合柱层析分离技术适用于香蕉PLD纯化,在PLD蛋白含量30.00μg、Ca2+浓度1.20 mmol/L、反应15.00 min及pH 6.5条件下,香蕉PLD活性最高。
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一株酸性糖化酶的分离纯化及酶学性质研究
《现代食品科技 》 2012
摘要：从土壤中筛选得到一株产酸性糖化酶的黑曲霉ASP-S21,粗酶液通过(NH4)2SO4沉淀、Sepharose HP阴离子交换层析、Sephacryl S-200层析柱分离纯化,SDS-PAGE电泳测定其分子量为120 kDa。该酶最适作用温度为65℃;酶的最适反应pH值为4.0;在pH 2.2~7.6之间,具有较好的酸稳定性;酶的Km值为0.94 mg/mL,Vmax=142.43 mol(Glu)/min.L。Cu2+和Co2+对酶活有较强的促进作用,10 mM的Cu2+使酶活力提高到129%,Fe3+对酶催化活力抑制作用较强。该酶且具有部分降解生淀粉的能力,在pH 4.0,50℃反应1h,生淀粉酶活力为0.39 U,RDA值为4.57%。得到的黑曲霉ASP-S21酸性糖化酶,产生的糖化酶活力高、耐酸稳定性好,酶学性质符合淀粉糖化工业化过程中对酶的要求,具有良好的研究前景。
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枯草芽孢杆菌B47菌株抗菌物质的分离纯化及其对玉米小斑病的防治作用
《中国生物防治学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis菌株B47为番茄内生细菌,能产生对多种植物病原菌有抑制作用的抗菌物质。通过盐酸沉淀、甲醇抽提、硅胶柱层析、凝胶过滤层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)法提取和纯化到该抗菌物质。理化性质测定结果表明,该物质热稳定性和抗紫外线稳定性好;在碱条件下稳定;对蛋白酶不敏感;能溶于甲醇;双缩脲反应呈阳性,茚三酮反应呈阴性,但经酸水解后茚三酮反应呈阳性,推测该物质可能为环肽类物质。该物质对测试的14种病原真菌有拮抗作用,其中,对玉米大小斑病菌和各种香蕉叶斑病菌的拮抗作用强,但对供试病原细菌无拮抗作用。该抗菌物质在0.3g.L-1浓度下对玉米小斑病的田间防治效果为53.05%。
关键词： 枯草芽孢杆菌 抗菌物质 分离纯化 抗菌谱 防治效果
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生淀粉酶生产菌株Paenibacillus sp.的筛选和酶的纯化及酶学性质
《生物加工过程 》 2010 CSCD
摘要：分离得到1株产生淀粉酶的菌株,通过扩增和测定16S rDNA序列并进行比对,发现是Paenibacillus属的细菌。液体摇瓶发酵结束后,其产生的生淀粉酶比酶活达108.5U/mL。通过饱和(NH4)2SO4沉淀、Sephacryl S-300层析的方法对其所产的生淀粉酶进行分离纯化,得到纯化的酶蛋白比酶活为5112.04U/mg,纯化倍数为14.1,相对分子质量约为1.0×105。该酶以木薯生淀粉为底物时,最适pH5.6,最适温度50℃。金属离子Ca2+、Mg2+对该酶具有激活作用,Zn2+、Cu2+、Fe2+、Ni2+、Mn2+、Co2+和EDTA2-对该酶均具有抑制作用。
关键词： Paenibacillus sp. 生淀粉酶 分离纯化
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铁皮石斛原球茎多糖DCPP3c-1的分离纯化及结构初步分析
《分析测试学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：铁皮石斛原球茎粗多糖(DCPP)经阴离子交换纤维素柱(DEAE-52)和凝胶柱(Sephadex G-200)依次层析,分离纯化得灰色多糖DCPP3 c-1。其纯度经比旋光度法、柱层析、紫外扫描检测,组分和结构经薄层层析、高效液相色谱、红外光谱及高碘酸钠氧化等试验分析。结果显示DCPP3 c-1为均一组分,相对分子质量为72.4 ku,由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,其分子物质的量之比为1.120 4∶1∶1.046∶23.354∶3.828∶1.046,分子中1→6残基占14%,1→2或1→4残基占40.7%,1→3键占45.3%。红外光谱显示其具有多糖特征吸收峰,并存在α-吡喃糖苷键。DCPP3 c-1是首次从液体悬浮培养的原球茎中分离得到的新型酸性杂多糖组分。
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