科研产出
沙田柚黄龙病近红外光谱检测研究
《中国南方果树 》 2021 北大核心
摘要：2019年从容县各乡镇轻度感病、中度感病、重度感病以及未感病但有其他黄化症状的305株沙田柚树上,采集了590份不同症状的叶片样品,在Nested-PCR检测的基础上,使用广州讯动网络有限公司开发的手持式近红外光谱仪采集光谱,建立标准数据库模型并进行验证。结果表明,以11月307份样品建立的近红外光谱标准数据库模型的检测效果较佳,总识别率81.75%,黄龙病阳性样品和阴性样品的识别率分别为83.41%和78.80%,假阳性率7.62%,假阴性率10.62%。其中,对斑驳黄化叶样品（Nested-PCR检测100%阳性）的识别率最高,达96.72%。在对2月283份样品的验证中,该模型识别能力较差。与Nested-PCR检测相比,近红外光谱检测具有无损、快速的优点,但在对带菌的无症状叶、缺素黄化叶（主要为缺镁）和不带菌的均匀黄化叶和其他黄化叶（主要为烂根、损伤导致的黄化叶）等的检测中灵敏度较低,分别易发生漏检和错检。
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通过嫁接传染的不同阶段黄龙病对椪柑转录组的影响
《基因组学与应用生物学 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：黄龙病(huanglongbing, HLB)是华南柑橘产区最严重的病害之一,主要通过柑橘木虱和嫁接等方式传播,不同的感病方式对寄主的影响可能有所差别.本研究通过嫁接的方式,研究黄龙病对椪柑在感病早期和发病晚期转录组的影响.在早期(14 wpi),总共有6 467个基因出现了显著差异表达,而在晚期(22 wpi),总共有9 625个基因出现了显著差异表达.对差异表达的基因进行KEGG富集分析,发现14 wpi组的差异表达基因总共有14个通路出现了富集,而22 wpi组的差异表达基因总共有24个通路出现了富集.对8个差异表达的基因进行荧光定量PCR验证,结果表明这些基因在两个阶段的表达变化趋势与转录组的数据基本一致.本研究通过研究黄龙病不同发病阶段的差异基因表达,为探究黄龙病的发病机理提供了一定的理论基础.
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种子传播黄龙病可能性研究
《南方农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探讨带菌种子能否传播黄龙病,为黄龙病防控策略的制定提供科学依据。【方法】采用单管双引物对Taq Man探针实时荧光定量PCR(STDP-q PCR)对从感染黄龙病沙田柚树上收集的种子进行黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asi-aticus,Las)检测,观察播种的沙田柚种子萌发生长情况,并用STDP-q PCR对萌发的幼苗进行Las检测。【结果】两份种子样品均能检测到Las。播种的108颗种子共萌发91颗(84.3%),部分沙田柚苗在生长初期表现叶片畸形或黄化症状,但随后恢复正常。由种子萌发而来的沙田柚苗经30、60、90、180和360 d生长后取样检测,均未检测出Las。【结论】黄龙病通过带菌种子进行传播缺乏证据。
关键词： 黄龙病 黄龙病菌亚洲种 种子传播 实时荧光定量PCR
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柑橘花器和种子中黄龙病菌的定量分布及应用
《植物保护学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为准确、快速测定感病柑橘花器和种子中黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,Las)的含量,比较了SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(SGI-qPCR)和单管双引物对TaqMan探针qPCR(STDP-qPCR)的检测灵敏度,并用STDP-qPCR法定量检测了感病沙田柚花器和种子中的Las。结果显示,STDP-qPCR检测灵敏度为1×100拷贝/μL,比SGI-qPCR高100倍;花器中的雄蕊、花瓣、雌蕊和花粉等组织,以及种子的种皮和胚乳组织中均可检测到Las,但含量差异较大,其中种皮组织中Las含量最高,达到109842个细胞/μg DNA,花粉中的Las含量最低,为308个细胞/μg DNA,所有种壳中均未检测到Las;基于雄蕊组织的黄龙病分子诊断准确率达93.8%。表明Las在感病柑橘花器和种子中呈不均匀分布,基于雄蕊组织的黄龙病诊断方法可辅助用于该病害的高通量检测。
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广西及广东惠州沙糖桔黄龙病亚洲种检测初报
《中国南方果树 》 2014 北大核心
摘要：采用柑桔黄龙病亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus)的16SrDNA特异引物fD1/fD2和OI1/OI2c,对采自广西沙糖桔主要产区及广东惠州的234份沙糖桔叶片样品DNA进行NestedPCR扩增,扩增产物在1%琼脂糖凝胶电泳上检测。结果表明,广西南宁、桂林、柳州、百色、崇左、梧州、来宾、防城港、东兴及广东惠州的沙糖桔部分或大部分感染了柑桔黄龙病亚洲种病原,检出率分别为35.7%、66.7%、70.0%、74.5%、54.5%、29.7%、88.9%、20.0%、33.3%、95.0%。
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广西南丰蜜桔感染黄龙病的调查研究
《中国南方果树 》 2013 北大核心
摘要：为了解广西南丰蜜桔黄龙病感染情况,在南宁、柳州和桂林等地采集南丰蜜桔黄龙病疑似样品,对样品按症状分类并记录,然后利用黄龙病亚洲种的16SrDNA特异引物fD1/fD2和OI1/OI2c进行PCR扩增,扩增结果在1%琼脂糖凝胶电泳上检测。结果表明,共收集了193份南丰蜜桔黄龙病疑似样品,其中,61份为斑驳型黄化,3份为均匀黄化,19份为缺锌状黄化,35份为表现正常,5份为叶脉黄化,70份为其他类型黄化。检出阳性样品共75份,总阳性率为38.9%,96%阳性样品出自非正常叶疑似样品。斑驳型黄化叶、缺锌状黄化叶、其他黄化叶和正常叶疑似样品阳性率分别是82.0%、31.6%、22.9%和8.6%,另两类样品阳性率为0。来自南宁、柳州和桂林的疑似样品检出阳性率分别为25.0%、36.6%和42.9%。黄龙病已经在广西的南丰蜜桔上发生严重为害。
关键词： 广西 南丰蜜桔 黄龙病 调查 Nested-PCR
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柑橘黄龙病病原DNA提取方法比较
《南方农业学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：[目的]筛选出一种快速高效获取柑橘黄龙病病原DNA的提取方法,为黄龙病亚洲种病原的检测奠定基础.[方法]选取5份疑似黄龙病症状柑橘叶片样品,分别采用4种试剂盒(快捷型基因组DNA提取系统、新型植物基因组DNA提取试剂盒、植物基因组DNA提取试剂盒、快速DNA提取扩增套装)及CTAB法提取柑橘叶脉基因组DNA,并用柑橘黄龙病亚洲种的16SrDNA特异引物fD1/fD2和01I/012c进行PCR扩增,DNA提取产物及PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶电泳上检测.[结果]快捷型基因组DNA提取系统获得的DNA质量最好,植物基因组DNA提取试剂盒和CTAB法提取DNA方法提取得到的DNA质量较好,新型植物基因组DNA提取试剂盒所获得的DNA质量较差,快速DNA提取扩增套装所获得的DNA质量最差.除陕速DNA提取扩增套装外,其余4种DNA提取方法均扩增出黄龙病亚洲种病原.[结论]快捷型植物基因组DNA提取系统试剂盒操作简单快捷,耗时短,提取的DNA效果较好,能够满足黄龙病病原PCR检测的要求.
关键词： 柑橘 黄龙病 试剂盒 CTAB DNA提取 PCR
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柑橘黄龙病病原菌非洲种和美洲种23S-5S rDNA序列的克隆及分析
《中国农业科学 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆柑橘黄龙病病原菌非洲种和美洲种23S-5S rDNA序列并和亚洲种相应区域进行比对,阐明黄龙病3个种核糖体RNA操纵子之间的关系。【方法】根据亚洲种23S-5S rRNA基因区域序列的保守性设计引物,在非洲种和美洲种DNA样品上扩增,对PCR产物进行克隆和测序,并对新获得的序列进行序列验证和分析。【结果】非洲种获得了3 057 bp序列包括23S rRNA基因、细胞壁脱氢酶假基因和5S rRNA基因;美洲种获得了3 033 bp序列包括23S rRNA基因、glpK基因和5S rRNA基因。3个种核糖体基因顺序分别是:亚洲种16S rRNA、tRNAIle、tRNAAla、23S rRNA、细胞壁脱氢酶假基因、5S rRNA和tRNAMet;非洲种16S rRNA、tRNAIle、tRNAAla、23S rRNA、细胞壁脱氢酶假基因和5S rRNA;美洲种16S rRNA、tRNAIle、tRNAAla、23S rRNA、glpK基因和5S rRNA。【结论】黄龙病病原菌核糖体RNA基因有特殊的排列方式,即在23S rRNA和5S rRNA基因区间均有反向编码的细胞壁脱氢酶基因,其中亚洲种和非洲种为假基因,美洲种为glpK基因。
关键词： 柑橘 黄龙病 非洲种 美洲种 23S-5SrDNA
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