科研产出
类芽孢杆菌胞外胆固醇氧化酶的分离纯化
《南方农业学报 》 2012 CSCD
摘要：【目的】探讨类芽孢杆菌产生胞外胆固醇氧化酶(COD)的分离、纯化方法,为其生产和应用提供技术支持。【方法】将类芽孢杆菌发酵液通过旋转蒸发浓缩、蔗糖透析浓缩、DEAE离子交换柱层析和凝胶层析,纯化目的蛋白,然后测定获得酶的基本酶学性质。【结果】类芽孢杆菌发酵液经DEAE离子交换柱层析和SephadexG-75凝胶柱层析后,纯化所得的COD比活力达6.83U/mg,酶活力回收为35.6%,纯化倍数为13.4倍。纯化酶经SDS-PAGE显示为均一条带,分子量约58kDa。将纯化的COD作用于不同浓度胆固醇,采用LineweaverBurk作图法,测得其Km=3.3×10-5mol/L。薄层层析结果显示,产物为胆甾-4-烯-3-酮,说明纯化所得酶是COD。【结论】纯化获得电泳纯类的芽孢杆菌胞外COD,其与底物亲和力较强,具有潜在的应用研究价值。
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生淀粉酶生产菌株Paenibacillus sp.的筛选和酶的纯化及酶学性质
《生物加工过程 》 2010 CSCD
摘要：分离得到1株产生淀粉酶的菌株,通过扩增和测定16S rDNA序列并进行比对,发现是Paenibacillus属的细菌。液体摇瓶发酵结束后,其产生的生淀粉酶比酶活达108.5U/mL。通过饱和(NH4)2SO4沉淀、Sephacryl S-300层析的方法对其所产的生淀粉酶进行分离纯化,得到纯化的酶蛋白比酶活为5112.04U/mg,纯化倍数为14.1,相对分子质量约为1.0×105。该酶以木薯生淀粉为底物时,最适pH5.6,最适温度50℃。金属离子Ca2+、Mg2+对该酶具有激活作用,Zn2+、Cu2+、Fe2+、Ni2+、Mn2+、Co2+和EDTA2-对该酶均具有抑制作用。
关键词： Paenibacillus sp. 生淀粉酶 分离纯化
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